DNA的测序方法、原理及其应用.pptVIP

一、DNA序列测定概述及其发展; 1963年，Sanger和Thompson等人第一次完成胰岛素51个 氨基酸的序列测定，这在当时来说是一件了不起的大事。70 年代后期，Sanger和Maxam----Gilbert等人又建立了核酸序 列测定的方法，Sanger双脱氧末端终止法和Maxam---- Gilbert化学裂解法将核酸序列测定技术推进到“直读”阶段， 使核酸序列测定变得远比蛋白质氨基酸序列测定容易，这样 人们可以通过核酸序列和遗传密码推导出蛋白质氨基酸的序 列。 ;二、测序的常用方法; 1）双脱氧链终止法测序(the chain termination method) 基本原理： 通过合成与单链DNA互补的多核苷酸链，由于合成的互补链可在不同位置随机终止反应，产生只差一个核苷酸的DNA分子，从而来读取待测DNA分子的顺序。 ;用于终止反应的双脱氧核苷酸： 将2’ ，3’ –双脱氧核苷酸（ddNTP）参入到新合成的DNA链中，由于参入的ddNTP缺乏3’ –羟基，因此不能与下一位核苷酸反应形成磷酸二酯键，DNA合成反应将中止。 ;O;O;;2）Maxam-Gilbert 化学降解法测序 基本原理： ① 用放射性核素标记待测DNA一侧末端 ② 将标记DNA分为G、A+G、C+T、C 4个反应体系 ③ 用不同的