培养基的组成及各成分的作用课题.pptxVIP

细胞培养基细胞培养基既是培养细胞中供给细胞营养和促使细胞生殖增殖的基础物质，也是培养细胞生长和繁殖的生存环境。细胞培养基的主要功能是提供细胞存活和增殖的适合PH和渗透压，以及细胞本身不能合成的各种营养物质。按照细胞培养基的发展历史，细胞大致分为：天然细胞培养基合成细胞培养基无血清培养基天然培养基天然培养基，在早期细胞体外培养中使用，是含有化学成分还不清楚或化学成分不恒定的天然有机物。直接取于动物组织提取液或体液，如血浆、血清、淋巴液、胚胎浸出液等。目前尚在使用的天然培养基有水解乳蛋白、牛血清等水解乳蛋白是乳白蛋白的水解产物，呈蛋黄色粉末状，富含氨基酸。一般配制成0.5%溶液，微酸性。合成细胞培养基合成培养基(synthetic medium)，又称为组合培养基合成培养基，是指根据目标培养物所需营养物质的种类和数量，精确设计并由已知成分的纯化学药品人工配制而成的，可精确掌握各成分性质和数量的一类培养基。1951年厄尔开发了供动物细胞体外生长的人工合成培养基(MEM)。合成培养基成分已知，便于对实验条件的控制。但与天然培养基相比，有些天然的未知成分尚无法用已知的化学成分所替代，因此，细胞培养中使用的基础合成培养基还必须加入一定量的天然培养基成分，以克服合成培养基的不足。最普遍的作法是加入小牛血清。动物血清成分复杂，各种生物大小分子混合在一起，有些成分至今尚未搞清楚。血清对细胞生长很有效，但后期对培养产物的分离、提纯以及检测造会成一定困难。另外高质量的动物血清来源有限，成本高，限制了它的大量使用。无血清培养基无血清培养基是不需要添加血清就可以维持细胞在体外较长时间生长繁殖的合成培养基。无血清培养基的发展大致经过了三代, 第四代培养基的研制开发并投入市场将成为发展趋势无血清培养基的组成及其主要补充因子无血清培养基一般认为是由两部分组成，即基础培养基和替代血清的补充因子。基础培养基 无血清培养基的基础培养基一般为与所需培养细胞相应的合成培养基，是按细胞生长需要由一定比例的氨基酸、维生素、无机盐、葡萄糖等组成的。在对不同的细胞进行培养时可根据需要对基础培养基和某些组分进行相应的调整。补充因子 补充因子是无血清培养基中用于代替血清的各种因子的总称。补充因子根据需求的必要性一般分为必需补充因子和特殊补充因子。必需补充因子是所有细胞株在无血清培养基中生长时都需要的，包括胰岛素、转铁蛋白和硒等。特殊补充因子一般含有激素、生长因子、微量元素、贴壁和铺展因子、维生素和酶抑制剂等。这些补充因子可使培养基既能满足动物细胞培养的要求，又能有效避免血清培养基成分不明确、有批间差异、常被病毒和支原体污染、血清来源不稳定、细胞产品不易纯化等问题。无血清培养基的组成及其作用氨基酸组成蛋白质的基本单位。?不同种类的细胞对氨基酸的要求各异，但有几种氨基酸细胞自身不能合成，必须依靠培养液提供，这几种氨基酸称为必需氨基酸。其中谷氨酰胺是细胞合成核酸和蛋白质必需的氨基酸，在缺少谷氨酰胺时，细胞会因生长不良而死亡 。 L-谷氨酰胺提供NAD，NADPH和核苷酸合成的氮元素，谷氨酰胺脱掉氨基后，可作为培养细胞的能量来源，参与蛋白质的合成和能量代谢。并作为新陈代谢的二次能量来源。必需氨基酸：L-苏氨酸、 L-组氨酸、L-亮氨酸、L-赖氨酸、L-蛋氨酸、L-苯丙氨酸、L-色氨酸、L-缬氨酸等。非必需氨基酸：甘氨酸、丙氨酸、、丝氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、天冬氨酸、谷氨酸等，这些氨基酸由碳水化合物的代谢物或由必需氨基酸合成碳链，进一步由氨基转移反应引入氨基生成氨基酸。非必需氨基酸也可加入到培养基中，以替代那些在生长过程中已被耗尽的成分，能够刺激生长，延长细胞的生存。维生素维持细胞生长的生物活性物质，在细胞代谢中起调节及控制作用。在细胞培养中，尽管血清是维生素重要来源，但是许多培养基中添加了各种维生素以适合更多的细胞系生长。脂溶性维生素如:A、D、E、K。水溶性维生素如:B1、B2、B6、B12、C、泛酸、叶酸、生物素等。许多维生素参与构成各种酶的活性基团的成分，没有它们，酶便没有活性，代谢活动将无法进行。VA是细胞合成糖蛋白时寡糖基的载体，对上皮细胞有重要的维护作用。VD参与调节钙的吸收。维生素 C 或维生素 E 通常作为抗氧化剂添加至培养基中，可防止组成生物膜的磷脂中不饱和脂肪酸被氧化。VK缺乏会引起低凝血酶原及凝血时间延长。叶酸是合成四氢叶酸的重要原料，四氢叶酸在核酸的生物合成和蛋白质的生物合成过程中起重要作用。维生素B群是生长刺激最常见的添加维生素。生物素是一些特异羧化酶的组成部分，参与糖代谢和脂肪酸的合成过程。许多维生素是细胞生长和增殖必不可少的。细胞不能合成足够数量的维生素，因此，是组织培养中重要的补充成分。无机盐及微量元素培养基中的无机盐包括 Na+、K+、Ca2+、Mg2