ELISA知识讲座之一免疫检测基础知识.pdfVIP

ELISA 是一种免疫测定。免疫测定（ immunoassay，IA ）是应用免疫学技术测定 标本的方法。在临床检验中主要通过抗原抗体反应检测体液中的抗体或抗原性物质。 1.1 抗原 抗原是能在机体中引起特异性免疫应答的物质。抗原进入机体后，可刺激机体产 生抗体和引起细胞免疫。在免疫测定中，抗原是指能与抗体结合的物质。能在机体中 引起抗体产生的抗原多为分子量大于 5000的蛋白质，例如乙型肝炎病毒表面抗原 （HBsAg）、甲胎蛋白（ AFP）等。小分子化合物在与大分子蛋白质结合后能引起机体 产生特异性抗体的，称为半抗原（ hapten ）。例如某些激素、药物等。抗原的反应性取 决于抗原决定簇（ antigenic determinant ），或称为表位（ epitope ）。一个抗原分子可 带有不同的决定簇，例如中可带有等决定簇。 1.2 抗体 1.2.1 抗体的结构 抗体是能与抗原特异性结合的免疫球蛋白 (immunoglobulin,Ig) 。Ig 分五类，即 IgG、 IgA 、 IgM、IgD 和 IgE 。与免疫测定有关的 Ig 主要为 IgG 和 IgM 。Ig 由两个轻链（ L）和两 个 重链（ H）的单体组成。 Ig 的轻链是相同的，有 κ （kappa ）和 λ （Lambda）两种型别。 五类 Ig 的重链结构不同，这决定了它们的抗原性也不同。 IgG 和 IgM 的重链分别称为 γ （gamma）链和 μ （mu）链。 IgG 的结构见图。 ① 木瓜酶裂解部位 ② 胃蛋白酶裂解部位 重链和轻链的 N端的氨基酸排列顺序 因各种抗体而异，称为可变区，分别用 VH和 VL 表示。两者构成抗体的抗原结合 部位，只与相应的抗原决定簇匹配，发生 特异性结合（见图） ，是抗体专一性结合 抗原的结构基础。 IgG 可被木瓜蛋白酶分解为三个区段，其中两个相同的区段称抗原结合片段 （Fab）。每个 Fab 都保存结合抗原的能力，但只有一个抗原结合位点，是单价的， 与抗原结合后不出现凝集或沉淀。另一区段称 Fc 段，无抗体活性，但具有 IgG 特有 的抗原性。 IgG 可被胃蛋白酶分解为两个片段，一个 Fab 双体，称 F （ab ）2，能和两个相 同的抗原结合；另一片段类似 Fc，随后被分解成小分子多肽，无生物活性。 IgM 是由五个单体组成的五聚体，含 10个重链和 10个轻链，具有 10个抗原结合 价，由于空间位置的影响，只表现为五个抗原结合价。 IgM 分子量约为 900000，IgG 分子量约为 150000 。 机体被微生物感染后，先产生 IgM 抗体，然后产生 IgG 抗体。经过一段时间， IgM 抗体量逐渐减少而消失，而 IgG 抗体可长期存在，在疾病痊愈后可持续数年之久。 IgM 抗体一般为保护性抗体具有免疫性。 因此 IgM 抗体的测定，对某些传染病如甲 型肝炎有较高的临床诊断价值。 右图为为甲型肝炎病人血清中 IgG 抗体和 IgM 抗体出现的时间和水平。 1.2.2 抗体的产生 机体受抗原刺激后， B 淋巴细胞产生相应的抗体。含有抗体的血清称为抗血清 （antiserum ）。每一系 B 细胞只产生针对某一抗原决定簇的抗体。如将多种抗原或含有 多个抗原决定簇的抗原注入机体，则将由多系的 B 细胞产生相应的多种抗体，这些抗体 均存在于免疫血清中。免疫测定中所用的抗血清一般用抗原免疫兔、羊或马制得。产生 抗体的 B 细胞可在体外与繁殖力强的肿瘤细胞融合成杂交瘤细胞。将单个杂交瘤细胞分 离，在体内或体外培养而分泌的抗体单克隆抗体（ monoclonal antibod