副溶血性弧菌.pptxVIP

第 七节、副溶血性弧菌检验;第 七节、副溶血性弧菌检验;2、培养特性;3、生化特性;V.P反应;1、吲哚试验( indol test) 细菌产生色氨酸酶，可分解蛋白胨中的色氨酸，生成靛基质（吲哚），靛基质与试剂对二甲基氨基苯甲醛作用，生成玫瑰靛基质。 色氨酸→ 吲哚（无色）＋对二甲基氨基苯甲醛→ 玫瑰吲哚（红色，+ 大肠杆菌） 不产吲哚（无色，- 产气杆菌） 试验方法：取培养24h培养液，先加入少量乙醚，摇动试管以提取和浓缩吲哚，待其浮于培养液表面后，再沿试管壁徐缓加入吲哚试剂数滴，在接触面呈红色，即为阳性。 应用：用于肠道杆菌的鉴定;2、尿素酶（Urease，脲酶）试验 有些细菌能产生尿素酶，将尿素分解、产生2个分子的氨，使培养基变为碱性，酚红呈粉红色。尿素酶不是诱导酶，因为不论底物尿素是否存在，细菌均能合成此酶。其活性最适pH为7.0。 酚红： 黄色→ 红色（+ 普通变形杆菌） 黄色（- 大肠杆菌） 试验方法：挑取18~24h待试菌培养物大量接种于液体培养基管中，摇匀，于36±1℃培养，观察结果。或涂布并穿刺接种于琼脂斜面，不要到达底部，留底部作变色对照。培养24h左右，观察结果，如阴性应继续培养至4天，作最终判定，变为粉红色为阳性。;3、氨基酸脱羧酶的测定;4、三糖铁（TSI）琼脂试验;O抗原（菌体抗原）：O1~O13 13种。 H抗原（鞭毛抗原）： K抗原（荚膜抗原）：K1~K71 65种。 （ 缺编：K2 、 K14 、K17、 K35、 K62） 血清分型：所有副溶血性弧菌的H 抗原均相同，但是O 抗原和K 抗原存在差异，以13种O抗原及65种K抗原将其分为13个群和845个型。;二、致病性;二、致病性;1、检验标准：GB/T 4789.7-2008 副溶血性弧菌检验 2、培养基和试剂 培养基： 3％氯化钠碱性蛋白陈水〔APW) 、 硫代硫酸盐-柠檬酸盐-胆盐-蔗糖（TCBS）琼脂 3％氯化钠胰蛋白胨大豆〔TSA）琼脂 3％氯化钠三糖铁（TSI?）琼脂 嗜盐性试验培养基 3％氯化钠甘露醇试验培养基 3％氯化钠赖氨酸脱狡酶试验培养基 3％氯化钠MR-VP?培养基 氯化??结晶紫增菌液 试剂：氧化酶试剂、革兰氏染色液、革兰氏染色液、3%氯化钠溶液、 V-P试剂、甲基红试剂、靛基质试剂等。;;初步鉴定：;生化试验：分别接种各类生化培养基，培养后观察结果。 或API?20E?生化鉴定试剂盒或VITEK全自动微生物检测系统鉴定。 生化性状符合下表要求时，为副溶血性弧菌 。;定性检测：报告25g（ml）样品中是否检出副溶血性弧菌。 定量检测：根据证实为副溶血性弧菌阳性的试管管数，查MPN检索表，报告每克（毫升）副溶血性弧菌的MPN值。;思考题;3、生化特性;1、吲哚试验( indol test) 细菌产生色氨酸酶，可分解蛋白胨中的色氨酸，生成靛基质（吲哚），靛基质与试剂对二甲基氨基苯甲醛作用，生成玫瑰靛基质。 色氨酸→ 吲哚（无色）＋对二甲基氨基苯甲醛→ 玫瑰吲哚（红色，+ 大肠杆菌） 不产吲哚（无色，- 产气杆菌） 试验方法：取培养24h培养液，先加入少量乙醚，摇动试管以提取和浓缩吲哚，待其浮于培养液表面后，再沿试管壁徐缓加入吲哚试剂数滴，在接触面呈红色，即为阳性。 应用：用于肠道杆菌的鉴定