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医学专业的论文大全精选 辣椒素对非小细胞肺癌侵袭能力影响及其机制讨论 近年来，关于辣椒素 capsaicin，CAP 抗癌作用的研究在国内外日益受到学者的高度重视。辣椒素是红辣椒中的一种活性成分。最近有研究表明，辣椒素可以抑制癌症细胞的增殖，促进凋亡，因此可以作为一种药物或传统化疗药物的辅助用药。目前恶性肿瘤占全球死因的第1 位，而肺癌是癌症相关死亡的首要原因，5年生存率15%。据预测，到2021 年，中国将有550 万新发肺癌病例，死亡人数将达400 万。在肺癌的病理学分型中，80% 为非小细胞肺癌 non-small cell lung cancer，NSCLC ，包括腺癌、鳞状上皮细胞癌和大细胞癌，其侵袭和转移能力是导致患者死亡及复发的主要原因，并使其成为作为当今世界上对人类健康和生命危害最大的恶性肿瘤之一，给患者和家属及其社会带来极大的经济负担。虽然辣椒素具有抗癌症作用，但是其有关于NSCLC 的研究鲜见报导。本研究采用人大细胞肺癌NCI-H460 细胞，旨在观察辣椒素对NCIH460细胞侵袭能力及E 钙黏蛋白 E-cadherin ，Slug 蛋白表达的影响，为明确辣椒素治疗恶性肿瘤提供实验依据，探讨其可能作用机制，以期为NSCLC 治疗提供新思路。 1 材料 1. 1 细胞人大细胞肺癌细胞NCI-H460，购自中科院上海细胞库。 1. 2 药物及试剂辣椒素 纯度 99% ，MTT，罗丹明标记的鬼笔环肽 美国Sigma 公司，批号分别为100081-202108，M2128，PHDR1 ，Transwell 小室 美国Corning 公司，批号3140908 ，E-cadherin 蛋白，Slug 蛋白，-actin 上海浩然生物技术有限公司，批号分别为著名ZM0092，ZM2356，1208 ，E-cadherin鼠抗人单克隆抗体 美国Pro Mab 公司，批2 ，Slug 兔抗人多克隆抗体 美国SantaCruz 公司，批号B2206 ，HRP 标记抗鼠IgG 二抗及HRP 标记抗兔IgG 二抗 上海碧云天公司，批号BSE-0140G，BSE-0520G ，逆转录试剂盒 日本Promega 公司，批号9035-81-8 ，Quant SYBR GreenPCR 试剂盒 美国TaKaRa 公司，批号BS-PCR003 。 1. 3 仪器DFC 450C 型倒置显微镜 德国莱卡公司 ，ABI-7300 型PCR 仪 美国ABI 公司 。 2 方法 2. 1 细胞培养NCI-H460 细胞保存在含有10%BSA 的RPMI-1640 营养培养基 含L-谷氨酰胺，青霉素100 UmL - 1 和链霉素100 UmL - 1 ，37 ℃，5%CO2及饱和湿度下培养。当NCI-H460 细胞达80%汇合度时，用0. 05%胰蛋白酶/0. 02% EDTA 消化。按照细胞密度2 106 个/孔接种于超低吸附6孔板中， 37 ℃，5 %CO2及饱和湿度下培养48 h。收集悬浮的细胞经EDTA 处理制备成单细胞悬液，然后用RPMI-1640 培养液洗涤细胞。收集对数生长期细胞，备用。 2. 2 药物配置辣椒素溶解于DMSO，配成500 mmolL - 1溶液，- 20 ℃ 保存。临用时，以完全培养液将辣椒素稀释到所需浓度。 2. 3 MTT 比色分析法测定细胞抑制率取对数生长期NCI-H460 细胞，按照细胞密度1 104 个/孔接种于96 孔板中，总体积为200 L，过夜培养。次日，实验组每孔加入终浓度为0， 100， 200， 300，400，500 molL - 1的辣椒素，空白组除未加辣椒素外，其余条件与实验组完全一致。每组设6 个平行孔，将培养板置于37 ℃ 5% CO2及饱和湿度下培养，分别培养24， 48 h 后，每孔加入MTT 溶液 5 gL - 1 20L， 37 ℃，继续培养4 h，终止培养，小心吸弃孔内培养上清液，然后每孔加入DMSO，振荡10 min，使结晶物充分溶解，570 nm 波长处，以空白培养液调零点，酶标仪测定吸光度A，取6 孔平均值。在graphpad prism 5 统计软件中计算出半数抑制浓度 IC50 。抑制率= A实验组- A空白组 / A空白组- A对照组 100%。 2. 4 微丝荧光染色观察根据江隆昌和欧阳理权等方法，取对数生长期NCI-H460 细胞，按照细胞密度2 103 个细胞/接种于96 孔板中，实验组每孔加入终浓度为100， 200， 300 molL - 1 的