4基因工程操作技术.pptxVIP

; DNA操作技术主要有：切割、连接、缩短、加长、转录成RNA，或者合成新的DNA，化学修饰、或者去掉特殊的化学基团。;学习内容：;1.1 核酸酶;1.1 核酸酶;1.1 核酸酶;1.1 核酸酶;1.1 核酸酶;1.2 连接酶;1.2 连接酶;1.3 聚合酶;1.3 聚合酶;1.3 聚合酶;1.3 聚合酶;1.3 聚合酶;1.3 聚合酶;1.4 DNA修饰酶;1.4 DNA修饰酶;1.4 DNA修饰酶;1.4 DNA修饰酶;1.5 拓扑异构酶;2 限制性内切酶;2 限制性内切酶; 限制-修饰现象;2.1 限制性内切酶的发现;2.2 限制性内切酶分类;I 类限制性内切酶;(II型)限制性内切酶;III型限制性内切酶;2.3 限制性内切酶的命名原则;Pvu I识别CGATCG，Pvu II识别CAGCTG, 都来自于Proteus vulgaris。 HindIII是在Haemophilus influenzae d株中发现的第三种酶。 EcoRI表示基因位于Escherichia coli中的抗药性R质粒上。 ;2.4 限制性内切酶产物;2.4 限制性内切酶产物;2.4 限制性内切酶产物;2.4 限制性内切酶产物;2.4 限制性内切酶产物;2.5 DNA分子中识别位点的数目;2.5 DNA分子中识别位点的数目;;2.6 反应程序;;2.6 反应程序;2.7 酶切结果分析 ; Standard electrophoresis (a)does not separate DNA fragments of different sizes,whereas gel electrophoresis (b) does ;2.7 酶切结果分析;放射性自显影显示DNA条带;2.8 估计DNA分子的大小;Figure4.16 Estimation of the sizes of DNA fragments in an agarose gel.;Figure4.17 Using a restriction map to work out which restriction endonucleases should be used to obtain DNA fragments containing individual genes.;2.9 绘制DNA分子的酶切图谱;绘制酶切图谱;绘制酶切图谱;绘制酶切图谱;2.10 多酶联合酶解 ;Figure4.19 Ligation: the final step in construction of a recombinant DNA molecule.;Figure4.20 The different joining reactions catalysed by DNA lligase. ;外源DNA与载体DNA的连接;3.1 相同粘性末端的连接;同种内切酶生产的粘性末端的连接;同尾酶生产的粘性末端的连接;不同酶的相同粘性末端的连接;3.2 平头末端的连接;3.3 不同粘性末端的连接;不同粘性末端的连接;3.4 人工粘性末端的连接 ;;人工粘性末端的连接 5‘突出末端;人工粘性末端的连接 平头末端;;3.5 粘端与平端的连接;1. Linkers;注意问题;2. Adaptors;Figure4.24 The distinction between the 5’-and 3’-terminal of a polynucleotide ;The use of adaptors;3.6 粘性末端的更换 ;粘性末端的更换;3.7 重组率;脱磷酸化 ;本章重点;9、春去春又回，新桃换旧符。在那桃花盛开的地方，在这醉人芬芳的季节，愿你生活像春天一样阳光，心情像桃花一样美丽，日子像桃子一样甜蜜。5月-215月-21Saturday, May 22, 2021 10、人的志向通常和他们的能力成正比例。23:30:0523:30:0523:305/22/2021 11:30:05 PM 11、夫学须志也，才须学也，非学无以广才，非志无以成学。5月-2123:30:0523:30May-2122-May-21 12、越是无能的人，越喜欢挑剔别人的错儿。23:30:0523:30:0523:30Saturday, May 22, 2021 13、志不立，天下无可成之事。5月-215月-2123:30:0523:30:05May 22, 2021 14、Thank you very much for taking me with you on that splendid outing to Lo