lipo2000转染操作步骤.pdf

资料收集于网络，如有侵权 请联系网站删除只供学习与交流 Stealth? RNAi or siRNA Transfection 以 24 孔板为例，其余规格的转染见表 1 1 中板，细胞密度为 30-50%适宜。 注意：根据转染后细胞检测时间长短决定细胞中板密度， 如果转染后需要长时间 后检测，则细胞中板密度适当降低，已避免细胞过度生长导致存活降低。 2 第二天（ 24-36 小时后）每个孔转染方式如下： A 将 20pmol siRNA 溶于 50ul Opti-mem 无血清培养基中。 B 将 1ul lipo2000 溶于 50ul Opti-mem 无血清培养基中，混匀室温放置 5min 。 C 将 A B 两管混合，放置 20min。 3 转染期间，将 24 孔板培养基换成无血清培养基，每孔 400ul 。将 C 管 mix 加 入 24 孔板对应孔中， 4-6 小时候换成有血清培养基。 Plasmid DNA Transfection DNA(ug):lipo 2000(ul)=1:2-3 转染时细胞密度越高，转染效率，表达效率也越高，并且可以降低细胞毒性。 1 中板。 5 贴壁细胞： 0.5-2X10 cells/well ，第二天待细胞密度达到 90%以上时转染 5 悬浮细胞： 4-8X10 cells/well ，中板后随即转染。 2 转染。 A 将 0.8ug DNA 溶于 50ul Opti-mem 无血清培养基中。 B 将 2ul lipo2000 溶于 50ul Opti-mem 无血清培养基中，混匀室温放置 5min 。 C 将 A B 两管混合，放置 20min。 转染期间，将 24 孔板培养基换成无血清培养基，每孔 400ul 。将 C 管 mix 加入 24 孔板对应孔中， 4-6 小时候换成有血清培养基。 只供学习与交流 资料收集于网络，如有侵权 请联系网站删除只供学习与交流 Table 1. Culture Shared reagents DNA transfection RNAi transfection 中板密度 * Culture Surf. Vol. of Vol. of DNA Lipofec RNA Lipofec vessel area per plating dilution tamine tamine well medium medium ?2000 ?2000 1000-10000 96-well 0.3cm2 100ul 2X25ul 0.2ug 0.5ul 5pmol 0.25ul cell/well 5 0.5-2X10 24-well 2cm2 500ul 2X50ul 0.8ug 2.0ul 20pmol 1.0ul cell/well 5 1-3X10 12-well 4cm2K 1ml 2X100ul 1.6ug 4.0ul