动物细胞培养技术.ppt

Volume 3 动物细胞工程 ; 动物细胞工程是通过对动物细胞及其组分的分工程序操作，研究生命活动的规律，实现对动物的遗传改造，结合非生物材料的手段，生产用于治疗人类疾病或缺陷的人工器官、组织、细胞及代谢产物或用于深入研究的材料等为主要研究内容的一门学科。;Chapter 1 动物细胞培养技术 ;本章主要教学内容： 动物细胞培养基本原理 体外细胞培养技术 动物细胞大规模培养;Section 1 动物细胞培养基本原理;一、动物细胞培养的定义 动物细胞培养是指用酶消化法将组织碎块分离成单个??胞，用培养基制成细胞悬液，在体外适宜条件下，使细胞生长繁殖，并保留其一定的结构和功能特性。 ;体外培养（in vitro culture）： 就是将活体结构成分或活的个体从体内或其寄生体内取出，放在类似于体内生存环境的体外环境中，让其生长和发育的方法。分为组织培养、细胞培养和器官培养。 体外细胞与体内细胞有何差异？ ;体外培养的与体内生长细胞的差异 细胞离体后，失去了体液的调节和细胞间的相互影响，生活在缺乏动态平衡的相对稳定环境中，日久天长，易发生如下变化： 分化现象减弱 形态功能趋于单一化或生存一定时间后衰退死亡，或发生转化获得不死性，变成可无限生长的连续细胞系或恶性细胞系。 如何分化？;体外培养中细胞的分化 细胞是否表现分化，关键在于是否存在使细胞分化的条件，如Friend细胞（小鼠红白血病细胞）在一定的因素作用下可以合成血红蛋白，血管内皮细胞在类似基膜物质底物上培养时能长成血管状结构，杂交瘤细胞能产生特异的单克隆抗体，这些均属于细胞分化行为。 ;二、动物细胞培养的发展历程 1907年，美国生物学家Harrison将蛙胚的神经组织培养在淋巴液中，存活数周，并观察到细胞突起的生长过程。 1923年，法国学者卡勒尔设计卡氏培养瓶培养鸡胚的心肌组织成功 1951年，厄利尔开发了供动物细胞体外培养的培养基;动物细胞基因工程：20世纪80年代以后，随着基因工程技术和细胞融合技术的迅速发展，已经能够把特定的外源基因通过PCR 技术扩增几千倍，并可转染到动物细胞内，使其得到高质量的表达。 近年来，已经启用了300升和1000升的培养罐分别用于生产单克隆抗体和灰色脊髓炎疫苗。 此外人体器官的培养为器官移植开辟了一条途径。;二、动物细胞培养的特点 与微生物细胞培养相比，动物细胞培养有哪些特殊之处？;动物细胞培养与微生物细胞培养相比，主要有以下不同： （1）动物细胞比微生物细胞大，无细胞壁； （2）动物细胞倍增时间长，生长缓慢，易 受污染； （3）培养过程需氧量少，对机械搅拌或剪 切力敏感； （4）动物细胞间主要以聚集体形式存在； （5）原代细胞一般繁殖50代左右即退化死 亡。;（6）大多数哺乳动物细胞只有附着在固体或半固体的表面才能生长； （7）动物细胞对于营养要求更加苛刻，除氨基酸、维生素、盐类、葡萄糖或半乳糖外，还需要血清； （8）对于培养环境的适应性更差，对环境极其敏感，包括pH 、溶解氧、温度、剪切力等都比微生物有更高的要求，一般需严格监控。;三、体外培养的类型 体外培养按过程可分为：原代培养（亦称初代培养）和传代培养（亦称继代培养）。 原代培养是指将机体取出的细胞或组织进行实效培养的过程。实效培养的细胞 大约增殖10代左右，这样的细胞称为原代细胞（primary cell）。 从原代培养的细胞继续转接培养称为传代培养。 按培养程度：细胞培养、组织培养、器官培养;体外培养 种类（培 养程度）;细胞系 是指由初代培养产生的能进行无限次代培养的细胞群。 大多数细胞在体外培养的条件下，经过有限次的分裂会死亡，例如，人体的成纤维细胞只可以培养几个月，传代50-100次死亡，但偶尔在一定的培养条件下，产生无休止进行繁殖的变异细胞，形成细胞系。 ;细胞系的特点： （1）可以提供大量的同一类型的细胞，有利于研究工作； （2）可以大量分离细胞产物，用于企业化生产； （3）可以长期冻存于液氮中，需要时可以解冻复苏； （4）细胞系细胞多数为非整倍体，个别为二倍体，如WI-38;常用的细胞系 （1）Hela细胞，1951年取自于Henrietta Lacks，她是一名宫颈癌患者，取材8个月后，die，而细胞则延续至今。;（2）CHO细胞，中国仓鼠卵巢细胞;（3）COS-7：SV- 40感染的非洲绿猴成纤维细胞;四、动物细胞（组织）培养的生长特性 －－体外培养细胞类型;1. 粘附型细胞 粘附有两种含义： （1）细胞之间相互接触； （2）细胞与细胞外基质结合。 动