现代色谱分离技术课件.pptVIP

1 原理 2 凝胶层析中常用的凝胶 琼脂糖凝胶 聚丙烯酰胺凝胶 葡聚糖凝胶 （Sephadex） 3 凝胶柱的使用 溶 胀 装 柱 上 样 洗 脱 羟丙基葡聚糖凝胶（Sephadex LH-20）为干粉，装柱前量好柱体积，再根据凝胶的吸水量计算干重， 称重后足量用有机溶剂（常用氯仿：甲醇=1：1）溶胀。 将层析柱垂直固定在铁架上，打开柱下口开关。将溶胀好的凝胶放在烧杯中，使凝胶表面的水层与凝胶体积相等。用玻璃棒搅匀凝胶液，顺玻璃棒灌入柱内。此时柱下口一边排水，上口一边加入搅匀的凝胶，可见凝胶连续均匀地沉降，逐步形成凝胶柱。当到达所需凝胶高度时，立即关闭下口，使凝胶完全沉降。 湿法上样： 打开层析柱的下口开关，放出凝胶柱面上的多余溶液，使液面与凝胶表面相平齐。 将样品加在凝胶表面，打开下口开关，控制流速，使样品慢慢渗入凝胶内。当慢慢渗入凝胶的样品溶液面与凝胶柱面相平齐时，关闭下口，完成上样。然后在凝胶柱面上加一层（3—5cm）洗脱液，接上洗脱瓶准备洗脱。 控制流速，过快或过慢影响分离效果。 流出液分步收集，分析、合并。 1 原理： 大孔树脂为新型非离子型分子聚合物吸附剂，白色球形颗粒，每个颗粒都是由许多彼此间存在孔穴的微观小球组成，称之为“大孔”。 （三）大孔树脂柱色谱 大孔树脂色谱是以大孔树脂为吸附剂，利用其对不同成分的