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分子生物学操作考核试题及评分标准 实验一： 质粒DNA的提取和纯化 步骤 考核目标及评分细则 满分值 一 1.明确实验目的（2分） 2.理解实验原理（3分） 5 二 1.选择恰当的药品和仪器（2分） 2.熟悉药品的配制（3分） 5 三 1.熟悉实验步骤（5分） 2.清除实验注意事项（5分） 10 四 进行实验： 实验准备：制备含有相应抗生素的固体和液体LB培养基，将保存的菌液涂布到固体培养基平板上培养单菌落（1～2天）。（5分） 挑取单菌落在含有对应于某一抗生素(如Amp或Kan)的LB培养液（25mL）中接种，37℃振荡培养过夜，使细菌处于对数生长期（约12－16个小时）。（5分） 吸取10mL培养液于eppendorf管中，12000rpm离心5分钟，弃去上清液，可用微量移液器适当吸取残余上清。细菌沉淀于管底。（5分） 加入1mL溶液Ⅰ，用手指或涡旋振荡器剧烈弹震，使菌体充分悬浮，室温下静置5min。（5分） 加入2mL新配制的溶液Ⅱ，盖紧管盖，上下温和颠倒eppendorf管2－3回，以混匀内容物（千万不要剧烈振荡）,冰浴静置5min。（5分） 加入1.5mL浴冷的溶液Ⅲ，上下颠倒混匀数次，冰浴条件下静置5min。（4分） 12000rpm离心10min，将上清液移至新的eppendorf管中（约400μL）。（4分） 加入等体积的酚：氯仿：异戊醇（25：24：1），充分振荡