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Primer-Blast： 在线引物设计工具 生物信息学 引物设计用于PCR 聚合酶链式反应 PCR：Polymerase Chain Reaction PCR 是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术，它可看作是生物体外的特殊DNA复制，PCR的最大特点，是能将微量的DNA大幅增加。 生物信息学 2 Why PCR? 在某个特定物种内 qPCR用于测定mRNA表达量：mRNA/cDNA水平 基因克隆：基因水平 ——引物设计的要求：引物在该基因组内或cDNA库中具备特异性 在一个已知基因序列的基因组A内设计引物，然后在另一个还未基因注释的（近缘）基因组B内扩增引物 ——引物设计的要求：（1）引物在该A基因组内或cDNA库中具备特异性，并且（2）引物在A和B内是保守的，所以设计的引物在A基因组内往往处于基因的编码区域（编码区域在不同物种间比非编码区更保守） 生物信息学 3 How to do PCR? 变性 生物信息学 4 退火 延伸 How: 引物设计原则 退火温度 (Tm )：两个引物的Tm值相差不能大于5℃，扩增产物与引物的Tm值相差不能大于10℃ 决定引物退火温度Tm值的最主要因素是引物长度 Tm = 4*（G+C）+ 2 *（A+T） 碱基组成 (G+C含量)：40%~60%，4种碱基要分布均匀 引物长度 不能有大于3bp的方向重复序列或