橄榄油紫外分光光度检测法.docxVIP

精品文档 COI/T20/Doc. no. 19/Rev. 3 2010 油脂紫外分光光度检测法 前言 紫外吸光度的检测能反应油脂的品质，加工过程会引起油脂吸光度的变化。 由于油脂中的某些成分存在共轭双键和三键结构， 所以会在特定波长下有紫外吸 1% 收。吸收度用 E1cm 表示 ( 1 g 油脂溶解于 100 mL 溶剂，比色皿光径为 1 cm ) 。 一般情况下也用 K（消光系数）表示。 1.范围 本标准规定了动植物油脂紫外吸光度测定的方法。 2.原理 将油脂溶解在所需溶剂中，以此溶剂为参比液，测定样品在特定波长下的吸 光度。 记录分光光度计的读数并计算样品的吸光度。 3.仪器 3.1 分光光度计，可读取 220 nm ～ 360 nm 波长。 3.2 1 cm 光径石英比色皿。 3.3 25 mL 容量瓶。 4.试剂 4.1 分析纯异辛烷（ 2,2,4- 三甲基戊烷），以蒸馏水为参比溶液，在 220 nm 处 的透光率不低于 60% ，在 250 nm 处不低于 95% 。 或者用分析纯环己烷，以蒸馏水为参比溶液，在 220 nm 处的透光率不低 于 40% ，在 250 nm 处不低于 95% 。 随意编辑 精品文档 或者用其它能完全溶解油脂的溶剂。 5.测定步骤 5.1 待测样品必须完全混匀并且无悬浮物。若油脂在室温下是液态的，则需在 30 ℃左右用滤纸过滤。 固体脂肪在高于溶点温度 10 ℃以内均质化并用滤纸过滤。 5.2 精确称量 0.25 g 样品，置于 25 mL 容量瓶内，用溶剂（异辛烷或环己烷） 溶解样品，并稀释至刻度。 该溶液必须清澈， 如有乳光或浑浊现象必须立即用滤 纸过滤。 5.3 将待测溶液倒入石英比色皿，用溶剂做参比，使用分光光度计测定在 232 nm ～ 276 nm 波长范围的吸光度，吸光度必须在 0.1 ～0.8 之间，否则应适当 加大样品浓度或进行稀释重新测定。 5.4 如果吸光度测定之前油脂需要过氧化铝柱，则按以下步骤处理： 30 g 碱性 氧化铝用己烷溶成悬浮状， 装层析柱。待氧化铝压实之后将多余的己烷吸出， 使 液面高于氧化铝约 1 cm 。溶解 10 g 油脂于 100 mL 己烷，按 5.1 均质化并过 滤，然后倒入层析柱。收集洗脱液，在低于 25 ℃下真空减压浓缩至无溶剂。然 后立即按 5.2步骤处理得到的油脂样品。 5.5 如溶剂使用异辛烷则最大吸收波长为 268 nm ，如使用环己烷则最大吸收波 长为 270 nm 。 结果计算 6.1 记录相应波长下的吸光度，按下式计算： Eλ kλ c.s 式中： 随意编辑 精品文档 Kλ：波长λ下的吸光度（以浓度 1 g/100 mL ， 1 cm 比色皿波长λ测得吸光度表 示）； Eλ：波长λ下测得的试样吸光度； C：试样溶液中样品的浓度，单位为 g/100 mL ； S：比色皿光径，单位为 cm 。 结果应保留两位小数点。 6.2 橄榄油的吸光度测定方法与欧盟规定的官方方法一致， 涉及到用异辛烷做溶 液检测 232 nm 和 270 nm 波长下的吸光度，并且需测定吸光度的变异值 K，）按下式检测： ΔK K m K m 4K m 4 2 Km 是波长 m 下的吸光度，最大吸收波长在 270 nm 附近。 注：如溶液用异辛烷则最大吸收波长为 268 nm 和 232 nm ，如溶液用环己烷， 则最大吸收波长为 270 nm 和 232 nm 。 附录Ⅰ 分光光度计的校正 A.2. 仪器必须六个月校验一次，包括波长响应值和响应值的准确性。 A.2.1. 波长校验可以用汞灯或使用合适的滤光片进行。 A.2.2. 光电管和光电倍增管响应值的校验按以下步骤进行：称 0.2000 g 分析纯 铬酸钾溶于 0.05 mol/L 的氢氧化钾溶液中， 定溶至 1000 mL 。取上述溶液 25 mL 于 500 mL 容量瓶中，用 0.05 mol/L 的氢氧化钾溶液稀释至刻度。 用 0.05 mol/L 的氢氧化钾溶液作为参比溶液， 1 cm 光径比色皿，测定此溶液在 275 nm 处的吸光度，应该为 0.200 ± 0.005 。 随意编辑 精品文档 方法精密度 2009 年，来自 13 个国家的 21 个拥有 IOC 认证的实验室参加了这次由执行秘 书处实施的合作检测。 共检测了五个样品： 特级初榨橄榄油 二次离心橄榄油 精炼油橄榄果渣油 初榨橄榄油 + 菜籽油 + 高油酸葵花籽油 初榨橄榄油 + 精炼大豆油测试结果见下表（ A.1-A.6 ） 表 A.1 232 nm 处的紫外吸收（异辛烷为溶液） 项目 A B C D E 实验室数量 21 22 22 22 22 可接受数量 2