PMA、PHA(1)文件文件文件.docxVIP

。 。 - -可编辑修改 - PMA 、PHA 1、PMA ：佛波醇酯类多克隆刺激剂，是 DAG （二酯酰甘油）的 analog ，脂溶性，自由通过细胞膜，直接作用于细胞活化信息传导通路上的 PKC 。 Ionomycin ：钙离子载体，使细胞内 Ca 2+ 浓度增加，激活 calcineurin 。 来自 PKC 和 calcineurin 的共同信号最终引起 T 细胞活化。 PMA 一般与离子酶素共用，一般用于进一步刺激活化的免疫细胞。 在体内活化的淋巴细胞到体外之后， 由于环境的改变， 体外缺少刺激因素， 所以， 这些活化的淋巴细胞在体外不能主动合成和分泌相关的细胞因子， 此时就可以加入 PMA 和离子酶素，提供类似体内环境的刺激因素，使其继续合成和分泌相关 的细胞因子，这样就可以通过收集上清用 ELISA 法检测其分泌的细胞因子，用胞内染色法检测合成的细胞因子。 所以， PMA 和离子酶素只是刺激已经活化了的淋巴细胞，使其在体外环境下继续合成和分泌细胞因子而已， 与体外实验中直接活化初始淋巴细胞完全是两个概念。 2、PHA ：植物血凝素类多克隆刺激剂，作用于 TCR－ CD3 复合体引起 T 细胞活化。 PMA+Ion 由于直接作用于 T 细胞活化信号传导通路的中游， 细胞活化快， 2h 大部分细胞已活化， 4h 基本全部活化，作用强劲。 PHA 作用 6h 的效果大致相当于 PMA+Ion 活化 2h 的效果，作用温和一些。 PHA（或 ConA ）适合刺激人的 T 细胞增殖， ConA 则对小鼠 T 细胞增殖作用更强一些。它们诱导细胞活化、增殖后都会在培养 72 h 后发生明显的 AICD （活化诱导的细胞死亡）现象。 3 、单独 anti-CD3 包被在板上能刺激纯化 T 细胞增殖，加入 anti-CD28 作用更 强。 正 常机体的 T 淋巴细胞在体外培养过程中， 受到特异性抗原或有丝分裂原 （植物血凝素或刀豆素等） 刺激， 细胞的代谢和形态可发生一系列变化。 主要表现为电荷的改变，细胞内蛋白质和核酸合成增加，及以细胞形态可转化为淋巴母细 胞。为此，在体外利用各种刺激剂激发淋巴细胞， 根据其转化程度可测定 T 淋巴细 胞 的 应 答 功 能 。 这 类 方 法 称 为 淋 巴 细 胞 转 化 试 验 （ lymphocyte leansformstoin test ）简称淋转试验，在临床上现已作为测定人体细胞免疫功能的指标之一。 细胞免疫缺陷时， 这种转化功能也降低。 目前最常用植物血凝素 （ PHA ）作为分裂原来检测淋巴细胞转化功能， 称 PHA 刺激淋巴细胞转化试验。 体外引起 T 淋巴细胞转化的刺激物种类颇多，大致有以下几类： 1、非特异抗原刺激物， 如从豆类中提了的植物血凝素 （PHA ）和刀豆素 A（ ConA ） 等，通称为促有丝分裂素（ mitogen ）。 2、特异性抗原刺激物，如结核菌纯化蛋白衍生物（ purifeg protein derivative 简称 PPD）等。 3、组织抗原和抗血清，如同种白细胞，抗淋巴细胞血清等。 然而，在上述各种刺激物中又以 PHA 应用最广。在体外淋巴细胞培养中，可使正常人外周血液中 T 淋巴细胞几乎均起转化， 其所引起的淋巴细胞转化率大大超过特异性抗原的作用。 PHA 又有 PHA-L 、PHA-E 、PHA-P 、PHA-M ，它们之间的差异又如何呢？对它们之间的一个比较： 1、PHA-E 是红细胞凝集素，有强红细胞凝集活性，弱丝裂原活性。 2、PHA-L 是白细胞凝集素，具有强丝裂原活性，弱红细胞凝集活性。 3、PHA-P 是未分离纯化 PHA-E 和 PHA-L 之前的原 PHA 蛋白(含 PHA-E 及 PHA-L 二种分子 )。 4、PHA-M 是粘蛋白形式的 PHA （可能就是结合了粘多糖）。 THANKS !!! 致力为企业和个人提供合同协议， 策划案计划书， 致力为企业和个人提供合同协议， 策划案计划书， 学习课件等等 打造全网一站式需求 欢迎您的下载，资料仅供参考