常用蛋白还原剂和变性剂.pdf

常用蛋白还原剂 1．DTT 中文名称为二硫苏糖醇 （Dithiothreitol ，简称为 DTT ），是苏糖醇的 C-1 及 C-4 位羟基置 换成巯基的化合物。在生化反应中用做还原剂，保护蛋白质或酶中的巯基不致氧化而失活。 也常用于还原蛋白质分子中的二硫键等。 DTT 是一种小分子有机还原剂，化学式为 C4H10O2S2。其还原状态下为线性分子，被 氧化后变为包含二硫键的六元环状结构。二硫苏糖醇的名字衍生自苏糖（一种四碳单糖） 。 DTT 的异构体为二硫赤糖醇（ DTE ），即 DTT 的 C3-差向异构体。 DTT 也常常被用于蛋白质中二硫键的还原，可用于阻止蛋白质中的半胱氨酸之间所形 成的蛋白质分子内或分子间二硫键。但 DTT 往往无法还原包埋于蛋白质结构内部（溶剂不 可及） 的二硫键，这类二硫键的还原常常需要先将蛋白质变性 （高温加热或加入变性剂，如 6M 盐酸胍、 8M 尿素或 1% SDS）。反之，根据 DTT 存在情况下，二硫键还原速度的不同， 可以判断其包埋程度的深浅。 2. β-巯基乙醇 英文名称：β-Mercaptoethanol ，化学式： HOCH2CH2SH ，分子量： 78.13，是一种具有特 殊臭味的无色透明液体，易燃、易溶于水和醇、醚等多种有机溶剂。 β-巯基乙醇 (又称为 2-巯基乙醇、 1-硫代乙二醇、 2-羟基乙硫醇、β -硫醇代乙醇）是一种 有机化合物，其化学式为 HOCH2CH2SH ，英文通用缩写为 ME 或β-ME 。它兼具乙二醇 （HOCH2CH2OH ）和乙二硫醇（ HSCH2CH2SH ）的官能团，为挥发性液体，具有较强烈的 刺激性气味。β -ME 通常用于二硫键的还原，可以作为生物学实验中的抗氧化剂。它被广泛 使用的原因是它的羟基使它能够溶解于水中， 并且降低它的挥发性。 由于具有较低的蒸汽压， 它的难闻的情况比起恶臭的硫醇要好得多。 2- 巯基乙醇可以打开蛋白质中存在的二硫键： cysS-Scys+2HOCH2CH2SH → 2cysSH+ HOCH2CH2S-SCH2CH2OH ，二硫键被打开后可以使蛋白质的四级或三级结构被破坏。 由于 2-巯基乙醇能够打开蛋白质的结构， 它常常被用于蛋白质分析。 而 2-巯基乙醇也常常被用于 保护蛋白质中自由的半胱氨酸巯基之间不会错误形成二硫键。作为还原剂， 2-巯基乙醇常常 可以与二硫苏糖醇（ DTT ）或三 (2- 甲酰乙基 )膦盐酸盐（ TCEP ）互换使用。 2-巯基乙醇是少数几种被发现可以延长小鼠寿命的化合物。在微克量级水平上， 2-巯基 乙醇被观察到对实验鼠的生命具有多种可能的正面效应。 3.TCEP 化学名称：三 (2-羧乙基 )膦；英文名称： Tris(2-carboxyethyl)phosphine （TCEP ）；分子量： 250.19。无色透明液体，不溶于脂肪烃，微溶于水，溶于醇、酮、酯、醚、苯、甲苯、二甲 苯等，能与氯仿及四氯化碳混溶，与醋酸纤维素、硝酸纤维素、醋酸丁酸纤维素、乙基纤维 素、聚氯乙烯、酚醛树脂、聚丙烯酸酯等高聚物相容性好。 TCEP 是一种非常有效的硫醇类还原剂， 广泛用作蛋白质化学及蛋白质组学研究中二硫 键的定量还原剂。 该试剂在水溶液中的稳定性和溶解性都很好。 在酸性、 碱性溶液中的稳定 性也不错。与其他类别的硫醇类还原剂如 DTT 相比， TCEP 不仅是一种高效的二硫键还原 编辑版 word 剂，而且在某些巯