基因工程的基本操作程序.pptVIP

1.2 基因工程的基本操作程序 复习 1.什么是基因工程？ 2.基因工程的基本工具有哪些？ 3.基因工程的最大优点？ 4.“分子手术刀”、“分子缝合针”和“分子运输车” 分别指什么？ 5.质粒的本质、特点是什么？载体的种类、必须具备的条件？ 1.目的基因 的获取 2.基因表达 载体的构建 3.将目的基因 导入受体细胞 4.目的基因的 检测与鉴定 基因工程的基本操作分四个步骤 有了目的基因，我们才能赋予一种生物以另一种生物的遗传特性 使目的基因在受体细胞中稳定存在，并可进行遗传、表达和发挥作用 载体进入受体细胞稳定表达，才能实现一种生物的基因在另一种生物体内的转化 才能确定目的基因是否真正在受体细胞中稳定遗传和正确表达 一、目的基因的获取 （一）目的基因的概念： 编码蛋白质的结构基因,也可以是一些具有调控作用的因子 （二）获取目的基因的常用方法有哪些? 1.从基因文库中获取 2.利用PCR技术扩增 3.人工合成 1.从基因文库中直接获取 （1）基因文库的概念： （2）基因文库的分类: 种类 基因组文库：含有一种生物的全部基因 部分基因文库：只包含了一种生物的部分基因，如：cDNA文库 （3）获取目的基因的依据： 某生物体内全部DNA 许多DNA片段 受体菌群体 （4）基因文库的构建方法 限制酶 与运载体 连接 基因组文库 某种生物某个时期的mRNA cDNA 反转录 受体菌群体 与运载体 连接 部分基因文库 （cDNA文库） 导入 导入 ①基因组文库的构建 通过对受体菌的培养而储存基因 ② cDNA文库的构建-----反转录法： 以目的基因转录成的信使RNA为模板，反转录成互补的单链DNA，然后在酶的作用下合成双链DNA，从而获得所需的基因。 目的基因的mRNA 单链DNA 反转录酶 DNA聚合酶 双链DNA (目的基因) ① 概念：PCR全称为_______________，是一项在生物_____复制_____________的核酸合成技术。 ③条件：_______________________________、 _____________________ 、 _______________、 ________________________________ ②原理：________________ ④方式：以_________方式扩增，即____ ⑤结果： 聚合酶链式反应 体外 特定DNA片段 DNA复制 已知基因的核苷酸序列（前提） 四种脱氧核苷酸 一对引物 耐热的DNA聚合酶（Taq酶） 指数 2n 使目的基因的片段在短时间内成百万倍地扩增 2.利用PCR技术扩增目的基因 ⑥过程： a.DNA变性(90℃-95℃):双链DNA模板在热作用 下，_______断裂，形成__________。 b.退火(复性55℃-60℃):系统温度降低，引物与DNA模板结合，形成局部________。 c.延伸(70℃-75℃):在Taq酶的作用下，从引物 处延伸，合成与模板互补的_________。 氢键 单链DNA 双链 DNA链 PCR技术扩增与DNA复制的比较 PCR技术 DNA复制 相同点 原理 原料 条件 不同点 解旋方式 场所 酶 结果 碱基互补配对 四种脱氧核苷酸 模板、能量、酶 DNA在高温下变性解旋 解旋酶催化 体外复制 主要在细胞核 热稳定的DNA聚合酶 细胞内的DNA聚合酶 大量的DNA片段 形成整个DNA分子 目的基因的mRNA 单链DNA (cDNA） 双链DNA (即目的基因) 反转录 合成 1）反转录法： 以目的基因转录成的信使RNA为模板，反转录成互补的单链DNA，然后在酶的 作用下合成双链DNA，从而获得所需的基因。 蛋白质的氨基酸序列 mRNA的核苷酸序列 结构基因的核苷酸序列 目的基因 推测 推测 化学合成 2）根据已知的氨基酸序列合成DNA法 ： 3.人工合成目的基因 1.下列属于获取目的基因的方法的是 ①利用mRNA反转录形成②从基因组文库中提取③从受体细胞中提取④利用PCR技术合成⑤利用DNA转录形成 ⑥人工合成 ① ② ③ ⑤ B. ① ② ⑤ ⑥ C. ① ② ③ ④ D. ① ② ④ ⑥ D 二、基因表达载体的构建——基因工程的 核心 1.目的： 使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代，同时使目的基因能够表达和发挥作用。 启动子 插入基因 表达载体 复制原点 抗生素基因 终止子 基因表达载体模式图 2.基因表达载体的组成 (1)启动子 (2)终止子 (3)目的基因 (4)标记基因等 它们各自的作用是什么? 启动子 插入基因 表达载体 复制原点 抗