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动物学教研室 College of Life Sciences 血红蛋白含量的测定 HubeiNormal University 实验目的要求 掌握比色法测定血红蛋白含量的方法。 基本原理 血红蛋白是红细胞的主要成分，在正常情况下，每个红细胞均含有一定量的血红蛋白。血红蛋白是由珠蛋白和亚铁血红素组成的结合蛋白质。血红蛋白除能与氧结合形成氧合血红蛋白外，尚能与某些物质作用形成多种血红蛋白衍生物。它们具有特定的色泽和吸光谱，在临床上，可用以诊断某些变性血红蛋白血症和血红蛋白的定量测定。 测定血红蛋白含量的方法很多，实验常用比色法。其原理是在一定量的血液中，血红蛋白经少量盐酸的作用，使亚铁血红素变成高铁血红素，呈现较稳定的棕色。用水稀释后与标准色比较，求出每100ml血液中所含的血红蛋白克数。正常成年男子每100ml血液平均含14.4g，女子为13.1g。 测定血红蛋白的意义 人血红蛋白参考值 成年男性：13--15克/dl ；成年女性：11--14克/dl ；儿童：（依年龄而异）12--14克/dl。 临床意义：大致与红细胞增减相似。高原地区居民的血红蛋白浓度一般比平原居民为高，这是机体对低气压环境的一种适应现象。一般来说，在疾病状况下，血红蛋白的增减是与红细胞的改变相平行的，即引起红细胞增多的疾病，也会使血红蛋白含量增加。使红细胞减少的疾病，也使血红蛋白含量减少。在贫血时，血液中的红细胞数量和血红蛋白浓度都有不同程度的下降，但不一定按相同的比例变化。有时红细胞数量可以减少很多，而血红蛋白的浓度的降低却相对地不那么显著，见于大细胞性贫血，由于单个红细胞所含的血红蛋白量较正常者为多。相反，也有的红细胞减少得不很多，而血红蛋白浓度却显著降低，例如缺铁性贫血，这是由于每个红细胞的血红蛋白含量比正常明显减少，故血红蛋白减低的程度较红细胞减少更为显著。 依据检验结果，分析病因，做到准确的诊断和治疗都是很必要的。 实验器材 血红蛋白计、0.1mol/LHCl、刺血针、滤纸片、酒精棉球、乙醚、95%酒精、蒸馏水。 方法与步骤 血红蛋白计包括 ①标准比色架，架的两侧镶有两个棕色标准玻璃色柱。 ②血红蛋白稀释管，有方形也有圆形的。两侧有刻度，一侧以g为计数单位，对侧以百分率计，按我国情况，是以每100ml血液内含血红蛋白14.5g为100%。③20mm3血红蛋白吸管，还有玻璃棒、滴管。 用滴管加0.1mol/LHCl于血红蛋白稀释管内，到刻度10处。 用刺血针刺破指尖采血，血滴宜大些。用血红蛋白吸管的尖端接触血滴，吸血至刻度20mm3处（0.02ml）。　 方法与步骤 用滤纸片或棉球擦净吸管口周围的血液，将吸管插入血红蛋白稀释管的盐酸内，轻轻吹出血液至管底部，反复吸入并吹出稀释管内上层的盐酸，洗涤吸管多次，使吸管内的血液完全洗入稀释管内。摇匀或用小玻璃棒搅匀后，放置10min，使盐酸与血红蛋白充分作用。 把稀释管插入标准比色架两色柱中央的空格中，使无刻度的两侧面位于空格的前后方，便于透光和比色。 用滴管向稀释管内逐滴加入蒸馏水（每加一滴要搅拌），边滴边观察颜色，直至颜色与标准玻璃色柱相同为止。稀释管上液面的刻度读数即为每100ml血液血红蛋白的克数。 注意事项 吹血液入稀释管及洗净吸管时，不宜用力过猛。 蒸馏水需逐滴加入，多做几次比色，以免稀释过量。每次比色时，应将搅拌用的玻璃棒取出，以免影响比色。 由于操作过程过长而造成吸管内血液凝固，堵塞管孔时，则要按下列溶液的顺序重复冲洗吸管，即用水→95%酒精→乙醚或丙酮。 生命科学学院 Thanks for your attention! College of Life Sciences 方法与步骤 用滤纸片或棉球擦净吸管口周围的血液，将吸管插入血红蛋白稀释管的盐酸内，轻轻吹出血液至管底部，反复吸入并吹出稀释管内上层的盐酸，洗涤吸管多次，使吸管内的血液完全洗入稀释管内。摇匀或用小玻璃棒搅匀后，放置10min，使盐酸与血红蛋白充分作用。 把稀释管插入标准比色架两色柱中央的空格中，使无刻度的两侧面位于空格的前后方，便于透光和比色。 用滴管向稀释管内逐滴加入蒸馏水（每加一滴要搅拌），边滴边观察颜色，直至颜色与标准玻璃色柱相同为止。稀释管上液面的刻度读数即为每100ml血液血红蛋白的克数。