细胞生物学实验学习.pptVIP

五、注意事项;编号;实验二 鸡血细胞的体外融合试验;一、实验目的与要求;细胞融合是用人工的方法使两个或以上的细胞融合成异核细胞。异核细胞可进入有丝分裂，使来自两个亲本细胞的基因组合在一起，形成只含一个细胞核的杂种细胞。;PEG溶液作为助融剂可改变各类细胞的膜结构，使两细胞接触点处脂类分子发生疏散和重组，引起细胞融合。 ;细胞融合的频率和活力与所用 PEG的分子质量、浓度、作用时间以及细胞的生理状态及密度等有关。本方法用分子质量为400～ 6000的PEG溶液可引起细胞的聚集???粘连，产生高频率的细胞融合。 ;三、实验材料、仪器和试剂;1. 鸡血细胞悬液的制备 从家鸡的翼根静脉采血制备抗凝全血。 加入4倍体积的0.85 %NaCl溶液，制成红细胞储备液，保存于4℃。取鸡血细胞储备液1ml，加入4ml 0.85 %NaCl溶液，混匀后，1200rpm离心5min，弃去上清液，再加入5ml 0.85 %NaCl溶液按上述条件离心一次。最后，弃去上清液，加入10ml的GKN溶液制成鸡血细胞悬液。取0.5ml鸡血细胞悬液，用GKN溶液稀释至1X107个/ml，备用。 ;2. 鸡血细胞的收集 吸取1ml鸡血细胞悬液放入离心管中，加入4mlHanks液混匀，1000rpm离心5min。弃去上清液，用手指轻弹离心管底部，使沉淀的血细胞团块松散。 3. PEG诱导细胞融合