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医药 培养基有效期的验证方案-2 精品 医药 培养基有效期的验证方案-2 精品 培养基有效期的确认 本方案已由下列人员审查并批准 1. 目的：确定日常环境监控、微生物限度检测使用培养基的有效期。 2. 接受标准: 2.1试验用菌悬液每1ml 含菌数应小于100cfu 。 2.2 培养基配制后无菌性检查和营养性检查需符合要求。 2.3 培养基的pH 值应符合相应培养基的要求。 3. 操作程序： 3.1实验仪器及器具： 生化培养箱LRH-250A （广东省医疗器械厂， 30-35℃, 23-28℃, 20-25℃）；XG1.DMX-0.36B 型脉动真空灭菌器（山东医疗器械股份有限公司 编号10.0311）；FE20型pH 计（梅特勒）；灭菌生理盐水；移液管；试管；双碟。 3.2验证培养基：硫乙醇酸盐流体培养基TGB(德国merk) ，大豆酪蛋白消化肉汤培养基TSB(德国merk) ，营养琼脂培养基NA(德国merk) ，萨布罗葡萄糖琼脂培养基SDA(德国merk) 、平板计数培养基PCA(德国merk) 、远腾琼脂培养基ENA(德国merk) 、硫酸月桂醇肉汤LST(德国merk) 、亮绿乳糖肉汤培养基BGLBB (德国merk) 、麦康凯琼脂培养基Mac.A (德国merk) 、大豆酪蛋白消化琼脂培养基TSA(德国merk) 、假单胞菌分离琼脂培养基PIA (BD)、绿脓荧光素测定用培养基PAF (德国merk) 、绿脓菌素测定用培养基PAP (德国merk) 、 甘露醇胆盐琼脂培养基 (MSA) (德国merk) 、溴化十六烷基三甲铵琼脂培养基（CET ）(德国merk) 、沙门氏菌增菌培养基(RVSB) (德国merk) 、木糖赖氨酸脱氧胆盐琼脂XLD(德国merk) 、麦康凯肉汤培养基Mac.B(德国merk) 、曙红亚甲蓝琼脂培养基EMB(德国merk) 、三糖铁琼脂TSI(德国merk) 、萨布罗葡萄糖肉汤培养基SDB(德国merk) 、梭菌增菌培养基RCM(德国merk) 、哥伦比亚琼脂培养基CA(德国merk) 、肠肝菌增菌培养基EEB-M(德国merk) 、紫红胆汁葡萄糖培养基VRBGA(德国merk) 3.3试验菌: 金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus [ATCC 6538] 大 肠 埃 希 菌Escherichia coli [ATCC 8739] 沙门氏菌Salmonella typhimurium [ATCC 14028] 铜 绿 假 单 孢 菌Pseudomonas aeruginosa [ATCC 9027] 枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis [ATCC6633] 生孢梭菌Clostridium sporogenes [ATCC 19404] 白色念珠菌Candida albicans [ATCC 10231] 黑曲霉Aspergillus niger [ATCC 16404] 3.4菌悬液的制备： 3.4.1各取金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌、生孢梭菌斜面培养物一支，无菌操作接种一白金耳至TSB 管中，30-35℃培养24-48小时，其中生孢梭菌需厌氧培养，取出置2－8℃贮存使用7天，每次使用前用灭菌生理盐水或灭菌水稀释至含菌约为10－100cfu/ml。 3.4.2取白色念珠菌斜面培养物一支，无菌操作接种一白金耳至TSB 管中， 20-25℃培养48-72小时，取出置2－8℃贮存使用7天。取黑曲霉菌SDA 斜面培养物用灭菌生理盐水洗脱孢子，置2－8℃贮存使用7天。每次使用前用灭菌生理盐水或灭菌水稀释至含菌约10－100cfu/ml。 3.4.3菌悬液计数 3.4.3.1无菌操作吸取菌悬液1ml ，加入含灭菌稀释剂100ml 的三角瓶中，摇匀成10-2稀释液，同样操作制备10-4和10-6稀释液（必要时也可作更大倍数稀释）。 3.4.3.2每种菌悬液备好二只灭菌双碟和融化好并放至50℃的NA 培养基和RNA 培养基TSA 培养基和SDA 培养基。 3.4.3.3向双碟内注入10-6稀释液（必要时可以是其它浓度稀释液）1ml 。 3.4.3.4向含稀释液的双碟内加入备好的培养基约20ml ，迅速振摇混合稀释液和培养基，并放置使凝固成平板，其中生孢梭菌置于厌养袋中。 3.4.3.5翻转双碟置适宜温度培养(金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌、生孢梭菌30-35℃培养24-48小时，白色念珠菌和黑曲霉菌20-25℃