间接免疫荧光--甲醇固定法.docxVIP

下载本文档

163
0
约小于1千字
约 1页
2021-07-16 发布于广东
举报
版权申诉

间接免疫荧光--甲醇固定法.docx

1、本文档共1页，可阅读全部内容。
2、原创力文档（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。
3、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击这里二次下载。
4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
5、该文档为VIP文档，如果想要下载，成为VIP会员后，下载免费。
6、成为VIP后，下载本文档将扣除1次下载权益。下载后，不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
7、成为VIP后，您将拥有八大权益，权益包括：VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
8、VIP文档为合作方或网友上传，每下载1次，网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等，对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档

间接免疫荧光--甲醇固定法间接免疫荧光--甲醇固定法间接免疫荧光——甲醇固定法 1、弃培养基，用PBS 洗盖玻片。（一定要洗干净将死细胞除尽，否则影响观察采图） 2、把盖玻片投入到-20度预冷的100%甲醇中，-20度冰箱10min （可以盛在用过的六孔板或60mm 的皿里，非常好用，建议用六孔板，空深不会溅出液体/面积小省试剂） 3、用PBST （含0.1%Tween20）洗固定的盖玻片，5-10min/次*3次（Tween20起到透化的作用，以利于抗体进入细胞内与抗原结合） 4、然后用10%NGS或BSA （PBST 配置）温育10-30min 。（此步后，玻片可暂存于4度的70%乙醇中，一星期后仍可获得理想的结果。封闭血清推荐用与二抗同种来源的血清，不可用与一抗同源的血清，以避免抗体交叉反应） 5、弃blocking buffer，室温加一抗（用1%BSA的封闭液稀释）温育1h 或37度温育30min ； 6、用含PBST 室温洗，5-10min/次*3次； 7、二抗（用1%的封闭液稀释）室温温育至少30min ；注意避光； 8、用PBST 室温洗，10min/次*3次 9、 DAPI 复染，50uL 室温静置5min 10、细胞面朝下放在一滴10uL anti-fade 的载玻片上，用指甲油或Gelvetol （封片剂）等封片，显微观察。 Reference: 《分子克隆实验指南系列：细胞实验指南》科学出版社2001.2月第一版p1006-1007