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血球计数板使用 血球计数板使用 血球计数板被用以对人体内红、白血球进行显微计数之用，也常用于计算一些细 菌、真菌、酵母等微生物的数量，是一种常见的生物学工具 血球计数板（改良牛鲍计数板） 用优质厚玻璃制成。每块计数板由H 形凹槽分为2个同样的计数池。计 数池两侧各有一支持柱， 将特制的专用盖玻片覆盖其上，形成高0.10mm 的计数池。计数池画有 长、宽各3.0mm 的方格，分为9个大方格，每个大格面积为1.0mm 2. 容积为 0.1mm 3（ul ），其中，中央大方格用双线分成25个中方格，位于正中及四 角5个中方格是红细胞计数区域，用单线划分为16个小方格。 四角的4个大方格是白细胞计数区域，用单线划分为16个中方格。根 椐国际标准局（NBS ）规定，大方格每边长度允许误差为±1%。 血球计数板是一块特制的厚型载玻片，载玻片上有四个槽构成三个平台。中间的 平台较宽，其中间又被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各刻有一小方格网，每个方格网共分九个大格，中央的一大格作为计数用，称为计数区。计数区的刻度有两种：一种是计数区分为16个大方格（大方格用三线隔开），而每个大方格又分成25个小方格；另一种是一个计数区分成25个大方格（大方格之间用双线分开），而每个大方格又分成16个小方格。但是不管计数区是哪一种构造，它们都有一个共同特点，即计数区都由400个小方格组成。 计数区边长为1mm ，则计数区的面积为lmm2，每个小方格的面积为1/400mm2。盖上盖玻片后，计数区的高度为0.1mm ，所以每个计数区的体积为0.1mm3，每个小方格的体积为1/4000mm3。 使用血球计数板计数时，先要测定每个小方格中微生物的数量，再换算成每毫升菌液（或每克样品）中微生物细胞的数量。 1．视待测菌悬液浓度，加无菌水适当稀释（斜面一般稀释100倍），以每小格的菌数可数为度。 2．取洁净的血球计数板一块，在计数区上盖上一块盖玻片。 3．将菌悬液摇匀，用滴管吸取少许，从计数板中间平台两侧的沟槽内沿盖玻片的下边缘摘入一小滴（不宜过多），让菌悬液利用液体的表面张力充满计数区，勿使气泡产生，并用吸水纸吸去沟槽中流出的多余菌悬液。也可以将菌悬液直接滴加在计数区上（不要使计数区两边平台沾上菌悬液，以免加盖盖玻片后，造成计数区深度的升高），然后加盖盖玻片（勿使产生气泡）。 4．静置片刻，使细胞沉降到计数板上，不再随液体漂移。将血球计数板放置于显微镜的载物台上夹稳，先在低倍镜下找到计数区后，再转换高倍镜观察并计数。由于生活细胞的折光率和水的折光率相近，观察时应减弱光照的强度。 5．计数时若计数区是由16个大方格组成，按对角线方位，数左上、左下、右上、右下的4个大方格（即100小格）的菌数。如果是25个大方格组成的计数区，除数上述四个大方格外，还需数中央1个大方格的血球计数板菌数（即80个小格）。为了保证计数的准确性，避免重复计数和漏记，在计数时，对沉降在格线上的细胞的统计应有统一的规定。如菌体位于大方格的双线上，计数时则数上线不数下线，数左线不数右线，以减少误差。即位于本格上线和左线上的细胞计入本格，本格的下线和右线上的细胞按规定计入相应的格中。见右图：即本格中计数细胞为3个。 6．对于出芽的酵母菌，芽体达到母细胞大小一半时，即可作为两个菌体计算。每个样品重复计数2-3次（每次数值不应相差过大，否则应重新操作），按公式计算出每mL （g ）菌悬液所含细胞数量。 7．测数完毕，取下盖玻片，用水将血球计数板冲洗干净，切勿用硬物洗刷或抹擦，以免损坏网格刻度。洗净后自行晾干或用吹风机吹干，放入盒内保存。 红细胞计数公式 红细胞数/L=N*25/5*10*10^6*200 N 为：五个中方格的RBC 总数 N*25/5为：中央大方格RBC 总数（即：0.1mm （ul ）的RBC 总数） N*25/5*10为：1mm （ul ）RBC 总数 N*25/5*10*10^6为：1L 的RBC 总数 *200为血液的稀释倍数 公式简化后：红细胞数/L=N/100*10^12 测微尺的构造和使用方法 测微尺分目镜测微尺和物镜测微尺. 目镜测微尺用来测量视野中的物体长度; 物镜测微尺是标准长度, 用来标定目镜测微尺. (1)目镜测微尺的构造 目镜测微尺是一块圆形玻片, 其中央刻有精确的刻度, 通常是将5mm 划分为50格, 实际每格等于100μm. 刻度的大小随着使用的目镜和物镜的放大倍数而改变, 用前必须用物镜测微尺来标定. (2)物镜测微尺的构造 物镜测微尺为一块特制的