(生物化学)SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质分子量-最新课件.pptVIP

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2021-07-16 发布于上海
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(生物化学)SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质分子量-最新课件.ppt

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(生物化学)SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质分子量;电泳的根本原理;TEMED：四甲基乙二胺 AP：过硫酸铵 Acr：丙烯酰胺;Acr：丙烯酰胺 Bis：双丙烯酰胺;SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定不同分子量蛋白质;十二烷基硫酸钠;SDS的作用;肌浆球蛋白;浓缩、别离胶的双重效应;三、主要实验器材;电泳装置;槽内固定架 ;加样器/枪〔pipet〕\枪头;不同量程的加样器;不同型号的加样头;;多道加样器;96孔板;多道加样器的功用;加样器的握法;选择恰当量程的加样器;;确定、调节量程;装配枪头;吸取溶液〔样品〕;;多道加样器取液;放置方式;四、操作步骤; 在平整的桌面上放下玻璃与夹子，使玻璃和夹子的底面完全对齐，向外扳动塑料卡口，关紧夹子。 ; 玻璃夹放在制胶架上，薄玻璃朝向自己。按弹簧夹，将玻璃夹卡入制胶架。在玻璃的间隙内分别灌制别离胶和浓缩胶，放上梳子，待胶凝固。 ;2. 别离胶的制备和灌注;3. 浓缩胶的制备和灌注;加梳子——一次平稳插入,梳口无气泡,梳底水平;4. 蛋白质样品的处理;5. 电泳;将底座的开关翻开，并向外拨动透明的架子，使中间空隙增大，放入电极架。 ;关上底座开关 ;参加缓冲液〔0.1%SDS，0.3%Tris，1.5%Gly〕，取出梳子，准备点样。;点样：向样品槽中参加 20-30μl样品;电泳：80V，15-20min〔浓缩胶〕；100V〔别离胶〕至指示剂距凝胶底边1cm。;6. 染色、脱色;7. 照相、分析结果;兔磷酸化酶B〔97400〕牛血清白蛋白〔66200〕兔肌动蛋白〔43000〕牛碳酸酐酶〔31000〕胰蛋白酶抑制剂〔20210〕鸡蛋清溶菌酶〔14400〕;8. 思考题