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生物素标记提取膜蛋白以及WB具体步骤 生物素标记提取膜蛋白以及WB具体步骤 一，Lipo2000转染 1, 准备细胞：转染前一天，向含9mlDMEM （含血清不含抗生素）的9cm 平板接入细胞，使其在转染时长到90%。转染前用DMEM （—）洗2遍后，加入9mlDMEM （不含血清不含抗生素） 2, 准备混合物： ①将6ug 质粒稀释于300ulDMEM （—）中，涡旋1s ，静置5min 。 ②将18ul Lipo2000稀释于300ulDMEM （—）中，涡旋1s ，静置5min 。 ③将①②混匀，静置20min 。 3，将混合物加入平板，前后摇匀。 4,6h 后给细胞换DMEM （含血清不含抗生素）。 5，继续培养8—48h ，观察。 二，生物素标记 1, 向皿中加入2ml 1mg/ml的生物素试剂。 2,4℃，温和shaking30min ，孵育后有一些细胞会悬浮起来，转移这些细胞至离心管中，离心收集细胞，并按下面方法洗涤细胞。 3，用2ml 含0.1mM Ca+，1mM mg2+，100Mm Glycine的PBS 清洗细胞2次，这时也会有一些细胞悬浮起来，转移它们到一个离心管，离心收集细胞。 4，加2ml 含0.1mM Ca+，1mM mg2+的PBS