生物化学实验FolinWu法定量测定.pptxVIP

Folin-Wu法 定量测定血糖的含量 ;　　;血糖及血糖水平的概念：; ;血糖测定的目的和意义; ; ;;掌握Folin－Wu法测定血糖含量的原理和方法。 学会制备无蛋白血滤液。 掌握7200型可见分光光度计的使用方法。 ;二、实验原理;三、实验仪器; 1、标准葡萄糖溶液（0.1mg/ml） (1)1%葡萄糖母液：称取1.000g葡萄糖，溶于蒸馏水，稀释并定容至100ml。 (2)葡萄糖标准液：取1.0ml葡萄糖母液于100ml容量瓶中，加蒸馏水定容。 2、10%钨酸钠溶液：称取钨酸钠10g，溶于蒸馏水并定容至100毫升。 3、0.33mol/LH2SO4溶液：于53ml蒸馏水中加入1ml的浓硫酸。 4、碱性硫酸铜溶液 A液：无水碳酸钠35g，酒石酸钠13g及碳酸氢钠11g溶于蒸馏水，稀释定容至1000ml. B液：硫酸铜晶体5g，溶于蒸馏水并定容至100ml。 临用时，A液：B液=9：1混合（体积比），混合液于冰箱中保存（4℃）。 ;5、酸性钼酸盐溶液： 称取钼酸钠600g,用少量蒸馏水溶解后倾入2000ml 的容量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀，倾入另一较大的试剂瓶中，加溴水0.5ml，摇匀，静止数小时后取上清夜500ml，于1000ml容量瓶中，徐徐加入225ml85%磷酸，边加边摇匀，再加25%硫酸150ml。 置暗处次日，用空气将剩余的溴赶去。然后加99%醋酸75ml，摇匀，用蒸馏水稀释定容至1000ml,贮于棕色瓶中。 ;1、无蛋白血滤液的制备： 用5ml移液管吸取全血（已加抗凝剂）1ml,缓缓放入100ml锥形瓶中，加蒸馏水7ml，摇匀，溶血后（血液变为红色透明）加10%钨酸钠1ml，摇匀.。 再加0.33mol/L H2SO41ml，边加边摇，加毕充分摇匀，放置5～15分钟，至沉淀变为暗棕色（如不变色可再加0.33mol/L H2SO41-2滴）。 用干滤纸过滤。先倾入少许，待滤纸湿润后在全部倒入，如滤液不清需重新过滤。每毫升无蛋白血滤液相当于1/10ml全血。;2、血糖的定量测定： 取25ml的血糖管3支，编号。第一支血糖管中加入2ml蒸馏水（空白管）；第二支血糖管中加2ml标准葡萄糖液；用吸管吸取无蛋白血滤液2ml，放入第三支血糖管中。 然后向三支血糖管中各加入2ml新配制的碱性硫酸铜溶液，同时置于沸水浴中8分钟，取出，在流水中迅速冷却后,勿摇动，各加4ml酸性钼酸盐溶液。 一分钟后，用蒸馏水稀释至25ml，混匀，用7200分光???度计在420nm波长处比色，以空白管调节零点。; 按下式计算100ml全血中所含血糖的含量 m=A1/A0×C0÷0.1×100 式中: m=100ml全血中含血糖毫克数 ; C0=标准液葡萄糖含量（0.1mg/ml）；A1=样品液光吸收值 ; A0=标准液光吸收值 0.1：1ml无蛋白血溶液相对于0.1ml全血;七、思考题;;五、实验步骤;分光光度计的工作原理;朗伯-比尔定律;朗伯-比尔定律应用;7200型分光光度计的操作程序;将参比样品溶液和被测样品溶液分别倒入比色皿中，打开样品室盖，将盛有溶液的比色皿分别插入比色皿槽中，盖上样品室盖。一般情况下，参比样品放在第二个槽位中。 将0％T校具（黑体）置入光路中，在T方式下按“0％T”键，此时显示器显示“000.0”;按 MODE键选择A模式 将参比样品拉入光路中，按“0A/100％T”键调0A/100％T，此时显示器显示的“BLA”直至显示“0.000”A为止。 当仪器显示器显示出“0.000”A后，将被测样品推入光路，这时，您便可从显示器上得到被测样品的吸光度。;中国海洋大学生物基础实验教学中心生化与分子生物学实验室;; ; ; ;9、春去春又回，新桃换旧符。在那桃花盛开的地方，在这醉人芬芳的季节，愿你生活像春天一样阳光，心情像桃花一样美丽，日子像桃子一样甜蜜。7月-217月-21Thursday, July 15, 2021 10、人的志向通常和他们的能力成正比例。23:14:0423:14:0423:147/15/2021 11:14:04 PM 11、夫学须志也，才须学也，非学无以广才，非志无以成学。7月-2123:14:0423:14Jul-2115-Jul-21 12、越是无能的人，越喜欢挑剔别人的错儿。23:14:0423:14:0523:14Thursday, July 15, 2021 13、志不立，天下无可成之事。7月-217月-2123:14:0523:14:05July 15, 2021 14、Thank you very much for taking me with you on that splendid outing to London.