高效毛细管电泳法在药物分析中的运用.pptxVIP

高效毛细管电泳法在药物分析中的应用;该内容共分两部分进行介绍第一部分 概述第二部分 高效毛细管电泳技术的分离模式及应用;第一部分 概述 高效毛细管电泳法(HPCE )又称毛细管电泳法(capillary electrophoresis，CE）。 是以毛细管为分离通道，以高压电场为驱动力，依据供试品中各组分之间淌度（单位电场强度下的迁移速度）和（或）分配行为上的差异而实现分离的新型液相分离分析技术。; 1937年，Tiselius(瑞典)将蛋白质混合液放在两段缓冲溶液之间，两端施以电压进行自由溶液电泳，第一次将人血清提取的蛋白质混合液分离出白蛋白和α、β、γ球蛋白； 第一次的自由溶液电泳； 一台电泳仪; ; 1981年，Jorgenson和Luckas，用75μm内径石英毛细管进行电泳分析，柱效高达40万/m，促进电泳技术发生了根本变革，迅速发展成为可与GC、HPLC相媲美的崭新的分离分析技术——高效毛细管电泳。 1988～1989年出现了第一批毛细管电泳商品仪器。 ;一、高效毛细管电泳法的特点; HPCE和普通电泳相比，由于其采用高电场，因此分离速度快；检测器则除了未能和原子吸收及红外光谱连接以外，其它类型检测器均已和HPCE实现了连接检测；一般电泳定量精度差，而HPCE和HPLC相近；HPCE操作自动化程度比普通电泳要高，与传统的电泳相比主要有四个特点，即高效、快速、微量和自动化。; 毛细管电泳技术兼有高压电泳及高效液相色谱等优点，其突出特点是: ;二、毛细管电泳的基本装置与操作;几个主要部分的特点:; 完成典型的HPCE实验，一般包括以下操作步骤：;;电渗 高效毛细管电泳操作中一个基本组成部分是电渗流（electroosmosis，EOF）。电渗流是毛细管内壁表面电荷所引起的管内液体的整体流动，来源于外加电场对管壁溶液双电层的作用。 CE所用的石英毛细管柱，在pH3的情况下，其内表面带负电，和溶液接触时形成双电层。在高电压的作用下，双电层中的水合阳离子引起流体整体向负极方向迁移的现象叫电渗。 电渗流是毛细管中的溶剂因轴向直流电场的作用而发生的定向流动。 ;电渗流的方向; 多数???况下，电渗流速度是电泳速度的5-7 倍。 因此，在毛细管电泳中利用电渗流可将正、负离子和中性分子一起朝一个方向产生差速迁移，在一次CE 操作中同时完成正、负离子的分离测定。由于电渗流的大小和方向可以影响CE 分离的效率、选择性和分离度，所以成为优化分离条件的重要参数。用来控制电渗流的方法主要有改变缓冲溶液的成分和浓度；改变缓冲溶液的pH 值；加入添加剂；毛细管内壁改性；外加径向电场；改变温度等。;四、影响高效毛细管电泳分离的因素;3. 分离电压 相对较高的分离电压会提高分离度和缩短分析时间，但电压过高又会使谱带变宽而降低分离效率。 ;第二部分 高效毛细管法的分离模式及应用;一、高效毛细管电泳的分离模式;1、毛细管区带电泳 CZE ;2、毛细管凝胶电泳 CGE; CGE 是毛细管自由溶液区带电泳派生出的一种电泳方式 ，用多孔性的凝胶或其它筛分剂作介质，网状结构，按分子的大小分离 ; 1） 将两种淌度差别很大的缓冲液分别作为前导离子(充满毛细管)和尾随离子，试样离子的淌度全部位于两者之间，并以同一速度移动。 2）负离子分析时，前导电解质的淌度大于试样中所有负离子的。所有试样都按前导离子的速度等速向阳极前进，逐渐形成各自独立的区带而分离。阴极进样，阳极检测。; 3）不同离子的淌度不同，所形成区带的电场强度不同(ν=μE)，淌度大的离子区带电场强度小，使溶质按其电泳淌度不同得以分离。 4）特点：界面明显，富集、浓缩作用；常用于分离离子型物质，目前应用不多。; 1)缓冲溶液中加入离子型表面活性剂，其浓度达到临界浓度，形成一疏水内核、外部带负电的胶束。; ; 1） 根据等电点差别分离生物大分子的高分辨率电泳技术； 2） 毛细管内充有两性电解质（合成的具有不同等电点范围的脂肪族多胺基多羧酸混合物），当施加直流电压（6～8V）时，管内将建立一个由阳极到阴极逐步升高的、稳定的、连续的、线性的 pH梯度； 3）氨基酸、蛋白质、多肽等的所带电荷与溶液pH有关，在酸性溶液中带正电荷，反之带负电荷。在其等电点时，呈电中性，淌度为零；; 4）聚焦：具有不同等电点的生物试样在电场力的作用下迁移，分别到达满足其等电点pH的位置时，呈电中性，停止移动，形成窄溶质带而相互分离；; 是将细粒径固定相填充到毛细管中