LC-MS基本知识及应用课件.ppt

011 杂质 -LCMS 谱图 杂质的可能结构式 N N N O N N N H O H 2 N O N N N N C 20 H 19 N 7 O 2 Mol. Wt.: 389.41 C 13 H 10 N 4 O Mol. Wt.: 238.24 N O N N N Mol. Wt.: 404.43 N O N N N Mol. Wt.: 220.23 N CN N N N H 2 N O N N N Mol. Wt.: 263.25 The MS data (only one peak, no other new peak!) and the HPLC data showed, the impurity 5 exist in the final product. THANK YOU! 基础知识 优点： 1. 2. 3. 4. 5. 灵敏度高， 10 -7 — 10 -8 g, 单离子检测可达 10 -12 g 快速，几分甚至几秒 测定分子量，确定分子式 分析范围广，便于混合物分析 新的电离、检测技术 局限性 : (1) 异构体，立体化学方面区分能力差。 (2) 重复性稍差，要严格控制操作条件 (3) 有离子源产生的记忆效应，污染等问题。 (4) 价格稍显昂贵，操作有点复杂 (5) 质量歧视效应 离子源 1. 电感耦合等离子体离子化（ icp ） 由于该条件下化合物分子结构已经被破坏，所以仅适用于元素分析。 2. 电子轰击电离（ ei ） 能提供有机化合物最丰富的结构信息，有较好的重现性 ，其裂解规律的研究也最为完善。 缺 点在于不适用于难挥发和热稳定性差的样品。 3. 化学电离（ ci ） 适合于色谱和质谱联用 , 低气压化学电离源可以在较低的温度下分析难挥发的样品，并能 使用难挥发的反应试剂，但是只能用于傅里叶变换质谱仪。 4. 大气压电离源（ api ） 液质联用仪最常用的离子化方式。 常见的大气压电离源有三种：大气压电喷雾（ ESI ），大气压化学电离（ APCI ）和大气 压光致电离（ APPI ）。 由于大气压电离源是独立于高真空状态的质量分析器之外的，故不同大气压电离源之间 的切换非常方便。 5. 基质辅助激光解吸离子化（ maldi ） 主要用于可达 100000da 质量的大分子分析，仅限于作为飞行时间分析器和 FT-MS 的离子源使用。 特别适合 蛋白质，多肽等大分子，可以直接从组织样品采集数据。 电喷雾 VS 大气压化学电离 ? ? ? ? ? 电离机理： 电喷雾采用离子蒸发，而 APCI 电离是高压放电发生了质子转移而生成 [M ＋ H]+ 或 [M-H]- 离子。 样品流速： APCI 源可从 0.2 到 2 ml ／ min ；而电喷雾源允许流量相对较小 , 一般为 0.2-1 ml ／ min. 断裂程度： APCI 源的探头处于高温，热不稳定的化合物会分解 . 适用范围： 电喷雾有利于分析极性大的小分子和生物大分子及其它分子量大的化 合物，而 APCI 更适合于分析极性较小的化合物。 多电荷： APCI 源不能生成一系列多电荷离子 LCMS Drying gas Nebulizer Gas From LC CDL 分液器 聚焦镜 Q-array 入口镜 四极杆 八极 前杆 ESI/APCI 隔离板 废液管 旋转泵 TMP 1 TMP 2 Detector 质量分析器 1. 四极杆质量分析器 2. 飞行时间质量分析器 3. 离子阱质量分析器 4. 傅里叶变换质量分析器四极杆质量分析器 5. 扇形磁分析器 多级质量分析 通常通过由惰性气体分子，例如氮气，氩气或 氦气，碰撞所选择的分子离子来实现的。这种 通过中性分子的碰撞把能量传递给离子的过程 就是所谓的“碰撞诱导解离（ CID ）” 。这种 能量传递足以使分子键断裂和所选择的离子重 排 碎片离子被用于对原来的分子离子的结构判断。 为什么使用 HPLC/MS/MS? ? 不需进行衍生化。 ? 在单个分析中实现确认 / 定量。 ? 在复杂 / 很脏的基体中的低检测限 ? 第一类仪器利用质谱在空间中的顺序，是由两台质谱仪串联组装而成 。即前面列出的串列式多级质谱仪。 ? 第二类利用了一个质谱仪时间顺序上的离子储存能力，由具有存储离 子的分析器组成，如离子回旋共振仪（ ICR ）和离子阱质谱仪。但不能 进行母离子扫描或中性丢失。 MS/MS 串联四极杆质谱 比单四极杆质谱的抗基质干扰能力和定性能力更好，与离子阱质谱相比定量重现性和检测灵敏度更好 质量范围及分辨率有限 四极离子阱 技术上而言，在传统 QqQ 的四极杆中加入了辅助射频，可以做选择性激发；或者就功能而言，为 QqQ 提供了多级串级的功能 四极杆 - 飞行时间质谱 QMS