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真菌多糖的化学结构 真菌多糖的化学结构 真菌多糖的化学结构可分为一级、二级、三级、四级结构。真菌多糖的一级结构主链主要有两种：一种是葡聚糖，以β-1，3糖苷键连接为主，兼有少量β-1，4或β-1，6糖苷键，如自然界中的茯苓多糖、云芝多糖等的分子结构；另一种是甘露聚糖，主要由α-糖苷键连接，如：冬虫夏草多糖是α-1，2糖苷键连接，银耳多糖和黑木耳多糖是α-1，3糖苷键连接。真菌多糖的二级结构是指多糖骨架链间以氢键结合形成的各种聚合体，只与分子主链的构象有关，不涉及侧链的空间排布形式。真菌多糖的三级结构是指由多糖中糖残基中的官能团间通过非共价作用而导致的有序、规则而粗大的空间构象。四级结构是指多糖多聚链间以非共价作用力而结合形成的聚集体。 多糖的结构单位可以是直链，也可以有支链：直链一般以α-1，4-和β-1，4-苷键连接，分支链中常以α-1，6-苷键连接。 1 真菌多糖结构研究方法的进展 经过分离纯化的多糖在测定结构前需检查其纯度并确定相对分子质量。目前检查其纯度和确定相对分子质量最常用的方法是高效凝胶液相色谱法（HPGPC ），即高效体积排阻色谱法（HPSEC ），采用示差折射检测仪（RI ）直接检测，如为对称的单峰，说明其均一性良好。需要注意的是，有些样品在水溶液中测定会出现不止一个峰，有可能是聚合所致，此时可换用二甲亚砜（DMSO ）作溶剂，会变成一个峰。体积排阻色谱一示差折射检测仪（SEC-RI ）测定多糖的相对分子质量，需用一系列已知相对分子质量的标准多糖做标准曲线，通过测定样品的洗脱体积，与标准曲线对比，得到相应的相对分子质量。目前最先进的检测仪是小角激光散射仪（LLS ），可以不用标准品而方便地测定多糖的相对分子质量及其分布，还可得到分子链的构象信息。近些年来，体积排阻色谱-小角激光散射仪（SEC-LLS ）结合诸如紫外（UV ）、折光指数（DRI ）检测器对于高度分散的聚合体系统的特征分析，被证明是一种非常好的有效的方法。 组成多糖的单糖品种繁多，单糖的连接顺序、连接位置的不同以及可能有的侧链使多糖结构更具复杂性，其结构鉴定也更困难。目前常用的多糖结构分析方法主要分为3大类，即化学分析法、物理分析法和生物学分析法。包括酸水解、高碘酸氧化、Smith 降解、甲基化分析等在内的化学分析法仍然是多糖结构分析常用的方法。物理方法主要包括紫外（UV ）、红外（IR ）、质谱（MS ）和核磁共振（NMR ）。生物学方法主要是酶学方法，即利用各种特异性糖苷酶水解多糖分子得到寡糖片断，通过分析寡糖片断的结构来推测多糖的结构。 近些年来，各种软电离技术如快速原子轰击电离质谱（FAB-MS ）、液态二次离子质谱（LSI-MS ）、电喷雾质谱（ESI- MS）、基质辅助激光解吸电离质谱（M ALDI-MS ）的出现使糖的分析有了很大的进展，可获得提供相对分子质量信息的分子离子峰和提供化合物结构信息的碎片峰。 二维NMR 技术（2D-NMR ）如COSY 、TOCSY 、ROESY 、 HMQC、HMBC 等的迅猛发展，为多糖的结构解析提供了有力的工具。由于多糖中大部分氢化学环境相似，氢信号相互重叠严重，造成解析的困难。H ，H-COSY 谱揭示质子与质子间的自旋偶合关系，包括质子间孪生、邻位和远程偶合相关。通过糖上质子间的偶合关系，可从容易辨认的质子（如异头质子或甲基质子）开始，寻找糖上其他碳位的质子。Laroeque 等从Bordetella avium中得到一个0-多糖，采用二维CO- SY，使每 个质子的信号得到确认。TOCSY 是分子内氢偶合链的接力相干信息，如果偶合常数较大，其信息会象接力赛一样沿着碳链传递，中止于偶合常数小的部位，不同的单糖残基有不同的偶合特征，根据TOCSY 的特征可以判断糖残基的类型。如P roteus mirabilis 0 40的脂多糖经缓和酸水解后，分离到一个0-多糖，建立在偶合常数J 2,3、J 3,4、J 4,5的基础上，从其COSY 和TOCSY 谱中鉴定了1个半乳糖和2个乙酞氨基葡萄糖的自旋系统，并从偶合常数J 1,2判断出单糖的构型。 NOESY与ROESY 谱提供了糖环质子的残基内的和残基间的NOE 相关，糖残基内的NOE 相关不仅能够提供有关糖残基相对立体化学的信息，并且可为归属残基内采用CO- SY和TOCSY 谱未能归属的质子信号提供有用的信息，而残基间的NO E 相关可为测定糖残基的连接顺序和糖基化位点提供关键性的信息。从Bordete lla cerium中得到的0-多糖，单糖残基内（H 2, H4）和（H 3，H 5）强的NOE 效应证实了葡萄糖残基的存在，（H 1,H 3）和（H 1，H 5）