冷丙酮沉淀蛋白结果报告.pdfVIP

实验论文 题 目有关冷丙酮沉淀蛋白时间及其效果研究 专 业 生命科学与技术 姓 名 贺位皇 职 称 实验技术员 二〇一四年十一月 目 录 摘要…………………………………………………………………………1 关键词…………………………………………………………………………………1 前言…………………………………………………………………………1 1 材料与方法………………………………………………………………………2 1.1 样品采集 ………………………………………………………………………… 2 1.2 方法准则 …………………………………………………………………………2 1 . 3 实验步骤………………………………………………………………2 2 结果分析……………………………………………………………………………………3 2.1不冷丙酮沉淀蛋白的不同时间与最终所得蛋白浓度之间的较 ………………………3 2.2 冷丙酮沉淀蛋白的不同时间与各蛋白胶图条带的比较 ………………………………4 3 讨论…………………………………………………………………………………………4 参考文献……………………………………………………………………………5 有关冷丙酮沉淀蛋白时间及其效果研究 贺位皇 （华大基因研究院质谱平台） 摘要：本研究抽选大麦为对象，采用 TCA-丙酮沉淀法提取蛋白，严格控制冷丙酮沉淀蛋白时间， 观察相对应时间下蛋白提取的结果。结果表明：用冷丙酮沉淀样品蛋白的时间与最后得蛋白浓度成 反比。 关键词：冷丙酮，沉淀蛋白时间，蛋白浓度。 前言 蛋白质（protein）是生命的物质基础，是构成细胞的基本有机物，是生命活动的 主要承担者。没有蛋白质就没有生命。因此，它是与生命及与各种形式的生命活动紧密 联系在一起的物质。机体中的每一个细胞和所有重要组成部分都有蛋白质参与。蛋白质 占人体重量的16%~20%，即一个60kg 重的成年人其体内约有蛋白质9.6~12kg。人体内 蛋白质的种类很多，性质、功能各异，但都是由 20 多种氨基酸（Amino acid）按不同 比例组合而成的，并在体内不断进行代谢与更新。 丙酮（acetone，CH COCH ），又名二甲基酮，为最简单的饱和酮。是一种无色透明 3 3 液体，有特殊的辛辣气味。易溶于水和甲醇、乙醇、乙醚、氯仿、吡啶等有机溶剂。易 燃、易挥发，化学性质较活泼。目前世界上丙酮的工业生产以异丙苯法为主。丙酮在工 业上主要作为溶剂用于炸药、塑料、橡胶、纤维、制革、油脂、喷漆等行业中，也可作 为合成烯酮、醋酐、碘仿、聚异戊二烯橡胶、甲基丙烯酸、甲酯、氯仿、环氧树脂等物 质的重要原料。 丙酮沉淀蛋白的机理是：根据库伦定律，溶液介电常数的下降（丙酮 25 摄氏度时 介电常数为21，水为81），造成静电作用力的增强，同时，丙酮与蛋白对水的争夺直接 导致水化层的破坏，从而造成蛋白沉降。丙酮造成蛋白变性的原因：常温或升温时，蛋 白立体结构展开，丙酮极容易与其中的色氨酸、酪氨酸等氨基酸进行疏水结合导致蛋白 变性，所以我们通常预冷丙酮并且低温操作。低浓度的盐不会沉淀，但是通常盐浓度高 于0.1molL 时，因为介电常数的降低导致盐的溶解度也下降而析出。初始蛋白浓度不易 过高，很容易造成共沉淀。 1 材料与方法 1.1 样品采集 选取同一植株的大麦麦粒。 1.2 方法准则 以冷丙酮沉淀植物蛋白的时间为单一变量。 1.3 实验步骤 1.3.1 称量同植株大麦麦粒样品4 份，各份取1g 进行提取实验； 1.3.2 将各样品置于研钵，加入 10%的PVPP，在液氮条件下研磨成粉末； 1.3.3 把粉末转至50ml 的离心管中，加入5ml Lysis Buffer 3，终浓度为1mM 的PMSF、 2mM 的EDTA，混匀，置于冰上5min 后加入终浓度为10mM 的DTT，冰浴超声5min； 1.3.4 15000g*4℃离心 20min，取上