四部分菌种退化复壮与保藏教学指导分析.ppt

3.砂土管保藏法 方法：孢子或芽孢悬液 → 加入无菌砂土管中→ 干燥→ 封口 → 保藏 措施：无营养，缺氧，干燥 适用：产孢子（芽孢）微生物 保藏期：1-10年 4.冷冻干燥保藏 方法：菌种培养 → 用保护剂悬浮 → 加入安醅管中→低温冻结（-25—-40℃）→抽真空（至0.01mmHg） → 真空封口 → 检查真空度 → 保藏 措施：低温、干燥，缺氧，有保护剂 适用：各大类 保藏期：5-15年或更长 5.甘油悬液低温冷冻保藏法 方法：菌种培养 → 15-30%甘油缓冲液悬浮 → 加入保藏管中 → 置 -70℃冰箱保藏 措施：低温（-70℃）、保护剂（15~50%甘油） 适用：细菌、酵母菌 保藏期：约10年 6.液氮保藏法 方法：菌种培养 → 保护剂悬浮 → 加入保藏管中 → 置液氮瓶中 措施：超低温（-196℃）、保护剂 适用：各大类 保藏期：>15年 第四节 菌种退化、复壮与保藏 在生物进化中： 遗传性的变异是绝对的，稳定性是相对的； 在变异中： 退化性的变异是大量的，进化性的变异是个别的。 一.菌种的退化 1.菌种退化degeneration的表现 生产性状的劣化,遗传标记的丢失, 原有的典型性状的不典型等 菌落及细胞形态的改变 生长速度缓慢 代谢产物生产能力下降，即负突变 致病菌对宿主侵染力下降 抗不良环境条件（抗噬菌体，抗低温）能力减弱 2、通过宿主体复壮：病原菌 3、淘汰已衰退的个体 对S. microflavus“5406”农用抗生菌的分生孢子采用-10～-30℃的低温处理5～7天，使其死亡率达到80%左右，结果会在抗低温的存活个体中留下未退化的个体，从而达到复壮的效果。 三. 菌种的保藏 （一）目的 使微生物菌种保持原来的性状和活力不退化、不死亡、不被污染，便于研究、交换和使用 。 （二）原理 挑选典型培养物（typical culture）的优良纯种，并创造最有利于休眠的环境条件，使微生物处于代谢不活泼、生长受抑制的休眠状态。 措施 低温：生长温度低限约为-30℃，水溶液中酶促反应温度低限-140℃ 干燥 缺氧 避光 缺乏营养 添加保护剂：甘油、脱脂牛奶、血清白蛋白 添加酸度中和剂 （三）菌种保藏方法 1.斜面保藏法 方法：接种适宜斜面培养基 → 培养 → 4℃保藏 措施：低温：4℃ 适用：各大类 保藏期：1-6个月 用橡皮塞代替棉塞，可适当延长保藏时间 2.石蜡油封藏法 方法：斜面或半固体接种 → 培养 → 加无菌蜡液高出培养基1cm→4-15℃保藏 措施：低温，隔氧 适用：不能利用石油的各大类 保藏期：1-2年 优点：简便