临床生化检验：6-批内重复性试验.pptVIP

实验三 批内重复性试验 检验系生化教研室 实验目的 掌握：批内重复性试验的原理和用途; 批内、批间、日间重复性试验 熟悉：批内重复性试验的操作及注意事项 误差的相关概念 随机误差（偶然误差） 是指在实际工作中，多次重复测定某一物质时引起的误差。 随机误差是由测定仪器、试剂、环境等实验条件的改变以及分析人员操作习惯等因素的变化而引起的。 系统误差 恒定系统误差指由干扰物引起使测定值与真值存在恒定大小的误差。误差大小与被测物浓度无关，而与干扰物浓度相关。 比例系统误差是指相对于被测物浓度有相同的百分比误差，误差的绝对量与被测物浓度成正比。 重复试验的相关概念 批内重复性试验：用同一份标本在短时间内用候选方法作多次（一般20次）重复测定。 日内重复性试验：在一天内对一个或数个标本作数批重复测定。 日间重复性试验：将同一份标本分成数份，按方法每天测一次，连续测定20天，观察结果变异。 批内重复性试验的原理 批内重复性试验是指在相同条件下（用同样的方法，同一种试剂和标准品，同一台仪器，在同一实验室由同一人操作，并保持实验期间准确度不变）对同一标本在尽可能短的时间内进行m轮，每轮n次重复测定，以获得批内精密度数据的试验方法。其结果能反映各次测定结果相互接近的程度，用于客观评价GOD-POD法测血糖随机误差的大小。 试剂与器材 GOD-POD试剂盒 单一试剂 葡萄糖标准液（15.1mmol/L） 标本：患者混合血清 蒸馏水 GOD-POD法测定血清葡萄糖原理 葡萄糖在葡萄糖氧化酶（GOD）的作用下生成葡萄糖酸和过氧化氢。后者与酚和4-氨基安替比林（4-AAP）在过氧化物酶（POD）的作用下生成红色的醌类化合物。可在500nm处检测，其颜色的深浅与葡萄糖含量成正比。 这个反应是一个标准的Trinder反应 Trinder反应 此反应首先由Trinder于1969年提出，故名Trinder反应。 Trinder反应构成了葡萄糖、胆固醇、甘油三脂及尿酸等酶法测定的基础，有较为重要的使用价值。 催化Trinder反应的过氧化物酶对底物专一性差，维生素C、尿酸、谷胱甘肽及胆红素等还原性物质也与色原性物质竞争H 2O2，从而使氧化过程中产生的H2O2被消耗，导致色素形成减少，测定结果偏低。此外，工具酶中如夹杂有较多的过氧化氢酶，也能消耗氧化产物H2O2，使被测物的测定值偏低。 操作步骤 混匀，置37℃水浴5分钟，在波长500nm处比色，以B管调零读取各管吸光度值。重复5轮，记录结果。 将血清标本用GOD-POD法作5轮，每轮4次血糖测定，即可获得20个测定数据。 试剂 加入物（ml） 蒸馏水 标准液 B S U×4 0.02 － － － 0.02 － － － 0.02 血 清 3 3 3 结果计算 1、各测定管浓度计算 测定管浓度（mmol/L）= AU AS ×15.1mmol/L 批内重复性试验的数据处理 测定批数 每轮测定次数（n）及测定值（Xi ) 1 2 3 4 1 2 3 4 5 合计 ∑Xi X Si Si2 批内均数= 每轮测定值均数之和（∑X） 测定轮数（m） 2、批内均数 3、批内标准差（Sω）= ∑Si2 m Si2= ∑（Xi－X）2 n－1 Si2为3轮各次测定值的方差，即 结果计算（2） 4、变异系数（CV%） CV% = 批内标准差Sω 批内均数（X） ×100% 5、检验20次测定数据中的离群值，如存在异常值应剔除再计算均值、标准差和变异系数。 结果计算（3） 检验20次测定数据中的离群值，如存在异常值时应剔除。 剔除离群值后，再计算均值、标准差和变异系数。 结果计算（4） 结果的判断 如试验求得的血清葡萄糖GOD-POD测定法的CV值小于WHO对中等实验室提出的OCV%（±3%）标准，即表明实验条件的控制达到最佳条件，试验结果可按OCV%报告。 OCV: optimal CV RCV: routine CV The variance under routine