实验1：大肠杆菌的培养和分离.ppt

2010.7.16;微生物;单细胞原核，分支状的菌丝（基内~、气生~）;单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群体（种群） 菌落是鉴定菌种的重要依据;芽孢：细菌的休眠体 ;结构 异养型，兼性厌氧型，革兰氏阴性(红色)(G-) 物质(元素)组成：C H O N P S…;按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。;培养基成分;消毒：较为温和的方法，如酒精 注：消毒不能杀死芽孢 灭菌：强烈，所有，完全无菌 灭菌消毒技术是微生物有关工作中最普通也是最重要的技术。;1、煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min 2、巴氏消毒法：70-75 ℃下煮30min或 80 ℃下煮15min（牛奶） 3、化学药剂消毒法:用70%酒精进行皮肤消毒;氯气消毒水源 4、紫外线消毒（空气）;(2)常用灭菌的方法：;称量-计算-溶化-灭菌-倒平板 灭菌：加上封口膜，用牛皮纸包好放在高压蒸汽灭菌锅中灭菌，1Kg压力灭菌15Min ;倒平板 ;紫外灯，过滤风，酒精灯，酒精棉球 在火焰旁右手3指拿锥形瓶，2指拿封口膜 使锥形瓶的瓶口迅速通过火焰 左手将培养皿打开一条缝隙，右手将培养基倒入培养皿，立刻盖上皿盖 待平板冷却凝固后，将平板倒过来放置 ;从大肠杆菌斜面→锥形瓶中的液体培养基 接种好后在37度摇床振荡培养12h 工具：接种环在接种前要灭菌 ;分离方法：平板划线分离法 原理：通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。在数次划线后，可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体，这就是菌落。 只能蘸一次、再次划线从上次末端开始、划好倒置培养1-2天、划线末端出现不连续的单个菌落 ;平板划线接种;18;第一区域;20;21; 1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？;2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？;将单菌落用划线法接种到斜面，37度培养24h后放入4度冰箱保藏;分离的另一种方法：稀释涂布平板法;分离的另一种方法：稀释涂布平板法;备注