结核病实验室诊断课件.ppt

痰涂片镜检注意事项 ? 选择痰标本中脓性、血样、干酪样的部分涂片阳性率 较高； ? 一张玻片只涂一份标本，玻片一次性使用，防止交叉 污染； ? 打开痰盒、涂抹痰膜、烧灼接种环时容易产生气溶胶， 应注意正确操作和自身防护； ? 石炭酸复红初染时必须加温。 痰涂片镜检的优点 ? 是直接发现原菌的检查方法，适用于痰、尿、便、体液、 组织等几乎一切标本，有重要的临床诊断价值。 ? 是发现和确定传染源的途径，是考核和评价疗效的重要 指标，有重要的流行病学意义； ? 操作简便，价格低廉，适于各级实验室开展； ? 快速，数小时可报告结果。 痰涂片镜检的缺点 ? 敏感性低：通常每毫升含 5000-10000 条以上抗酸菌 才可得到阳性结果； ? 特异性较低：只能报告“抗酸菌阳性”，不能区分结 核和非结核分枝杆菌； ? 镜下只能观察菌体形态，不能辨别死、活菌。 分离培养的重要意义 ? 是结核病病原学诊断的“金标准” ? 是开展进一步检测的基础 分离培养的操作流程 1 痰标本中加入 1-2 倍体积 4%NaOH 2 涡旋振荡 1-2 分钟 3 室温静置 15 分钟 4 分别接种 0.1ml 前处理液至 2 只培养基斜面 7 6 接种后 3 天、 7 天 观察，此后每周 观察一次 有菌落生长需经 抗酸染色确认， 至第 8 周无菌落 生长报告阴性 5 置 37C 温 箱培养 分离培养的注意事项 ? 选择痰标本中脓性、血样、干酪样的部分进行培养阳 性率较高； ? 从加入前处理液到接种的时间不得多于 20 分钟，否则 影响阳性率； ? 涡旋振荡、离心、倾倒上清液、接种时容易产生气溶 胶，应注意使用安全仪器，正确操作。 ? 发现培养基上菌落生长需经抗酸染色确认后方可报告 阳性。 分离培养的结果报告方式 培养基斜面无菌落生长： 菌落约占斜面面积 1/4 ： 菌落约占斜面面积 1/2 ： 菌落约占斜面面积 3/4 ： 分枝杆菌生长阴性（ - ） 分枝杆菌生长阳性（ + ） 分枝杆菌生长阳性（ 2+ ） 分枝杆菌生长阳性（ 3+ ） 培养基斜面上菌落数少于 20 个：报实际菌落个数； 菌落满斜面或菌苔样生长： 分枝杆菌生长阳性（ 4+ ） 分离培养的优点 ? 敏感性较直接涂片法高，理论上 10-100 条菌 / 毫升可 检出阳性； ? 特异性较直接涂片法高，可以从菌落生长速度、色素 产生初步判断非结核分枝杆菌； ? 分离出具有活力的纯培养物，为进一步试验提供基础。 分离培养的缺点 ? 需时长，根据接种量的大小，一般 2-8 周才能得到肉眼 可见菌落。 ? 结果受标本保存运送时间、培养基成分和质量、前处 理方法等影响， 操作较直接涂片法复杂，需经严格培 训 。 ? 需培养基凝固灭菌器、离心机、涡旋振荡器、恒温培 养箱等设备。 ? 成本是直接涂片法的 7-8 倍。 药物敏感性测定的重要意义 ? 临床治疗的重要参考 ? 流行病学的重要指标 此 ppt 下载后可自行编辑 结核病实验室诊断 现代结核病控制策略 DOTS 政府承诺 开展以痰检为主的病人发现工作 应用标准短程化疗并实施督导管理 建立正规的药物供应系统 建立监测系统 我国结核病控制目标 2005 年全球结 核病控制目标 DOTS 策略 覆盖率（ % ） 涂阳病人 发现率（ % ） 涂阳病人治 愈率（ % ） 100 70 85 2003 年全 国现状 85 45 85 2004 年 全国目标 95 60 85 2005 年 全国目标 100 70 85 结核病细菌学实验室 在国家结核病控制规划（ NTP) 中 起到举足轻重的作用 应当得到各级政府、领导和有关单位 的高度重视！ 分枝杆菌生物学概述 ? 分枝杆菌属裂殖菌纲，放线菌目，种类甚多，目前已命名 的有 50 多种，一般可分为缓慢生长和快速生长两大类。 ? 结核分枝杆菌是 1882 年郭霍（ Robert Koch ）从肺结核 病人痰标本中发现。是人类结核病的主要病原菌。 ? 分枝杆菌呈分支状生长， 营养要求比普通细菌高，是一 种生长缓慢的革兰氏阳性杆菌。 ? 经石炭酸复红染液染色后，可以抵抗盐酸酒精脱色，故称 此类细菌为 抗酸菌。 分枝杆菌分类 类别 缓 慢 生 长 Rubyun 分群 结核分枝杆菌复合群 非结核分枝杆菌 I 群 对人致病的分枝杆菌 人型、牛型、非洲型 堪萨斯、海、猿 非结核分枝杆菌 II 群 瘰疬 非结核分枝杆菌 III 群 鸟 - 胞内、蟾 快速生长 非结核分枝杆菌 IV 群 偶发、龟 结核分枝杆菌结构 ? 在电子显微镜下可见菌体微细结 构。结核分枝杆菌由细胞壁、细胞膜、 细胞质、核物质组成。 细 胞 壁