实验一根尖细胞有丝分裂制片与观察.pptVIP

实验一根尖细胞有丝分裂制片与观察;[目的要求]： 1、学习植物根尖有丝分裂制片技术； 2、了解和辨别有丝分裂各个时期的染色体特征 3、掌握染色体的观察和计数方法。;[实验原理]： 植物根尖的分生细胞的有丝分裂，每天都有分裂高峰时间，此时经过适当取材处理，加以固定、离析、染色、压片等步骤，可以迅速地将细胞分散附着于载玻片和盖玻片之间，再置于显微镜下观察，可以看到大量处于有丝分裂各个时期的细胞和染色体。细胞由第一次有丝分裂结束到第二次有丝分裂结束所经历的过程为一个细胞分裂周期，包括间期、前期、中期、后期和末期。 间期：一般持续时间比较长，是核内染色体DNA合成的过程，能看到核的变化，如核和其内的核仁体积增大，核内存在染色质，一般情况看不到染色体。;[实验原理] 续： 前期：细胞核内染色体呈细丝状，在核内互相缠绕成团。核仁开始消失，核膜随之破裂。此时染色体已由两条染色单体所组成，只在着丝点处连结。 中期：各染色体的着丝点排列在赤道面上，两臂伸向赤道面的两旁。纺锤体完全形成，其一端与染色体的着丝点相连结，另一端集中于细胞的极处。中期染色体高度浓缩，具有各物种染色体的典型形态，是染色体计数的最好时期。 后期：每一染色体的着丝点分裂，两条染色单体彼此分开成两个子染色体，子染色体在纺锤丝的牵引下，分别移向两极。 末期：移向两极的染色体，逐渐松散成染色质，纺锤丝逐渐消失，在赤道面上开始出现细胞板，把一个细胞分隔成两个子细胞，核膜从新形成，核仁出现，逐渐进入间期状态。 ;材料：黑麦、小麦的根尖。 试剂：无水乙醇、45%醋酸、卡诺固定液（无水乙醇∶冰醋酸=3∶1）、1N盐酸、蒸馏水、1%醋酸洋红、改良品红。 器具：显微镜、恒温箱、载玻片、盖玻片、染色缸、试剂瓶、酒精灯、镊子、剪刀、纱布、吸水纸。;操作程序： （1）取材：选取小麦种子浸泡于温水中，使种子吸胀，再置于垫有湿滤纸的培养皿中，于25℃条件下发芽，待根长约1-2cm在大量细胞进行分裂时剪根。 （2）预处理：剪取的根尖放入盛有蒸馏水的小瓶，置于冰水溶液中，0-3℃处理24小时?? （3）固定：主要是杀死细胞，尽可能保持生活时的真实状态并便于染色。将经过预处理的根尖冲洗干净后，用滤纸吸去沾着的水滴，以卡诺固定液固定24小时。 （4）解离：将固定好的根尖移入盐酸酒精离析液中，在35℃下离析8分钟，或在1N盐酸中，60℃下离析15分钟。;操作程序： （5）染色：将离解好的根尖用蒸馏水冲洗几次，在1%醋酸洋红中染色2-4小时；或置于染色缸里，加改良品红溶液，静置染色10-15分钟。 （6）压片：取已染色的根尖，置于载玻片上，在分生组织处切取一小块，加45%醋酸（或改良品红）一滴，盖上盖玻片，用刀片架起盖玻片一角，用镊子尖轻敲几下，使材料分散，移去架起的刀片，再轻敲几下，在酒精灯上微微加热，吸去多余的染液，用手指垂直压片（切勿移动盖玻片），即可镜检。 （7）观察：在显微镜下观察上述制片，先用低倍镜找到分裂相后转高倍镜，可清楚观察到有丝分裂各个时期的图象。 ;[重要实验步骤]： 根尖培养的好坏是本实验能否成功的关键之一，实验前准备足够的种子发根，只剪主根，已保证能得到尽可能多的分裂相。实验的第六步，压片一定要用力均匀，垂直瞬间用力，这样得到的染色体才能在一个水平面上。 每五人一个实验小组，一人一台显微镜，在做实验之前，仍不清楚的可参考老师的演示、讲解实验的难点和注意事项。;[实验注意事项] ： 实验的第六步，敲片一定要用力均匀，不能太用力敲，否则会敲破盖玻片，也不能用力太小，否则细胞不能分散开，压片时用拇指垂直瞬间用力往下压，这样得到的染色体才能在一个水平面上。 注意刀片、镊子和显微镜的正确使用方法。 ;[作业] ： 1、在上述实验过程中，固定、解离的作用是什么？ 2、绘出所观察到的有丝分裂各时期的图象