细胞生物学：第2章 细胞生物学研究方法 .ppt

思考题：1、普通光学显微镜、暗视野显微镜和相差显微镜各有什么特点，适于观察什么类型的样品？2、电子显微镜技术有哪些发展？与光学显微镜技术比较有哪些优缺点？3、细胞组分的分析包括那些基本的实验技术？ * * CHAPTER 2 细胞生物学研究方法 Experimental Approaches for Studying Cells * OUTLINE 2.1显微成像技术（TECHNIQUES OF MICROSCOPY） 2.2 细胞组分的分析方法 （TECHNIQUES OF CYTOCHEMISTRY、 CELL SORTING、 ISOLATION OF CELL COMPONENT） 2.3 细胞工程技术（CELL ENGINEERING） 2.4 组学研究技术 (GENOME、TRANSCRIPTOMICS、PROTEOME) * 2.1 TECHNIQUES OF MICROSCOPY 镜像形成的三要素: ?照明系统 (illumination) ?样品 (sample) ?透镜系统 (optics) 物镜: 玻璃 vs 电磁透镜 目镜： 玻璃 vs 荧光屏 可见光 vs 电子束 Light Electron 光学显微镜 电子显微镜 (The Light Microscope) (Electron microscope) * 2.1.1 光学显微镜（The Light Microscope） 2.1.1.1技术参数： ?放大率 (magnification, M) M=物镜放大率 X 目镜放大率 ?分辨率（resolution, R）:分辨出相邻两个物点间的最小距离 R=0.61λ/NA （λ:波长，可见光0.4~0.7μm） ?显微镜的数值孔径 (numerical aperture, NA) NA =n sina （n，介质折射率; a，镜口角） ? ? ? 最大分辨率a:70° n:1.5(油) λ :450nm(可见光) 200nm(紫外光) * 2.1.1.2 常用光学显微镜： ◆普通双筒显微镜 (binoular microscope) ◆相差显微镜: (phase contrast microscope) ◆微分干涉显微镜 (differential interference microscope） ◆暗视野显微镜 (dark field microscope) ◆荧光显微镜 (fluorescence microscope) ◆激光共聚焦显微镜 (laserconfocalscaning microscope) * 倒置显微镜 正置显微镜 * ◆相差显微镜： (phase contrast microscope) 无色、透明、活细胞结构 环形光阑（annular diaphragm） 相位板（annular phaseplate） 标本密度不同导致光程差 振幅差 * DIC ◆微分干涉显微镜： (differential interference microscope） 更强立体感 ，便于显微操作 * ◆暗视野显微镜 (dark field microscope) ： 物体轮廓，无微细结构 丁达尔现象：光斜射到样品上 * ◆荧光显微镜： (fluorescence microscope) 紫外光源激发细胞内 荧光标记染料 Excitation Emission * ◆激光共聚焦显微镜： (laserconfocalscaning microscope) 激光扫描、分辨力提高、可立体三维重建 * 2.1.2 电子显微镜 (Electron microscope) 电子束波长比光短100000倍 亚显微结构（超微结构）：R 1nm ?基本结构 ◆电子光学系统由照明系统、标本室、成像系统、观察窗和记录用的照相机等组成； ◆真空系统是保持电镜的真空度； ◆电子学系统即供电系统，需要高压稳压。 * 电子显微镜种类： ◆透射电子显微镜：细胞内部结构观察 (transmission electron microscope) ◆扫描电子显微镜：样品表面形貌特征观察 (scanning electron microscope) ◆扫描隧道显微镜 (scanning tunneling microscope) 微观世界物质表面特征，但样品必须是导体 ◆原子力显微镜 (atomic forc