一种基于HIV-1 TAT蛋白质转导结构域细胞内转导系统的成功改建.docVIP

一种基于HIV-1 TAT蛋白质转导结构域细胞内转导系统的成功改建 摘要：目的??探索本室构建的pET14b-His-TAT-Flag重组载体表达的融合蛋白在细胞中转导效率低的原因，建立高效的细胞内转导系统。方法??通过PCR方法去除原有载体中的Flag序列，在改建正确的pET14b-His-TAT重组载体基础上插入EGFP编码序列，将经酶切、DNA测序鉴定正确的pET14b-His-TAT-EGFP质粒转化E. coli BL21(DE3)，经IPTG诱导表达、SDS鉴定正确，再经蛋白透析、过滤处理。将His-TAT-EGFP融合蛋白加入ECV304细胞中，用荧光显微镜观察。结果??重组质