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小鼠实验性缺氧（讲稿） 教学目的：掌握各型缺氧动物模型的复制方法；观察缺氧时呼吸系统的改变及血液颜色的变化；了解环境温度改变对缺氧耐受性的影响；了解中枢神经系统功能状态改变时机体对低气压所致缺氧耐受性的影响。 重点：不同类型缺氧的模型复制方法及其原理。 难点：小鼠腹腔注射操作以及不同组小鼠肝脏呈现不同颜色的原理。 教学时间：2学时 一、实验原理 缺氧是指组织供养缺少或者不能充分利用氧，导致组织代谢、功能和形态结构异常变化的病理过程。根据缺氧的原因和血氧变化特点，将缺氧分为乏氧性缺氧、血液性缺氧、循环性缺氧和组织性缺氧四大类。 乏氧性缺氧的常见原因有氧分压降低和呼吸系统疾病，其共同特征是PaO2、CO2、SO2均降低，实验中将小白鼠放入装有钠石灰的密闭缺氧瓶内，造成吸入气氧分压降低，而二氧化碳分压不伴随升高，从而引起乏氧性缺氧。 血液性缺氧是由于血红蛋白性质和含量改变所致的缺氧，实验利用一氧化碳和亚硝酸钠中毒的方法,使血红蛋白失去携氧能力，从而引起血液性缺氧，其中亚硝酸钠中毒所形成的高铁血红蛋白，可被还原剂美蓝还原成正常血红蛋白，恢复带氧能力，达到抢救和预防的目的。 机体对缺氧耐受性受多种因素影响,本实验将探讨环境温度改变和CNS功能状态改变对缺氧耐受性的影响,当环境温度升高、中枢神经系统兴奋时,机体代谢率增高，单位时间内耗氧量增加，对缺氧耐受性降低；反之，机体对缺氧耐受性增强。本实验利用中枢神经系统兴奋剂可拉明和中枢神经系统抑制剂乌拉坦来改变中枢神经系统功能的状态。 在不同类型的缺氧小鼠中，皮肤和肝脏颜色各不相同，这取决于血液中血红蛋白的颜色。在乏氧性缺氧模型中，形成的乏氧血红蛋白为紫绀色；在CO中毒的模型中，形成的碳氧血红蛋白为樱桃红色；在亚硝酸钠中毒的模型中，生成的高铁血红蛋白为咖色。 二、实验操作及步骤 1. 不同类型缺氧模型复制 （1）乏氧性缺氧：取1号小鼠及5克钠石灰放入缺氧瓶中，盖紧瓶塞，复制乏氧性缺氧。 （2）一氧化碳中毒性缺氧：取2号小鼠，并与一氧化碳发生装置相连，然后将3ml甲酸与2ml 浓硫酸放于锥形瓶中，塞紧后用酒精灯加热。 （3）亚硝酸钠中毒性缺氧：取3、4号小鼠，观察正常表现后，分别向腹腔注入5%亚硝酸钠0.3ml，其中3号注入亚硝酸钠后，立即腹腔注射1%美蓝溶液0.3ml，4号注入生理盐水0.3ml。 观察指标：动物的一般情况、呼吸频率、鼠尾及口唇颜色。每3分钟重复观察上述指标一次，直至动物死亡为止，记录存活时间。 2. 环境温度改变对缺氧耐受性的影响： （1）取两个缺氧瓶，各放入钠石灰5克。 （2）取500ml烧杯两个，一个加入碎冰块，将杯内水温调制0~4℃，另一个加入热水，将温度调制40~42℃。 （3）取5、6号两只小白鼠，称重后装入两个缺氧瓶内，盖紧瓶塞，然后将两个缺氧瓶分别放于装有碎冰和热水的烧杯内。 3. 中枢神经系统状态对低气压所致乏氧性缺氧耐受性的影响： 取7、8、9号三只小鼠，分别腹腔注射5%乌拉坦、1.5%可拉明、生理盐水各0.3ml。 4. 肝脏颜色的观察： 将1、2、3、4号小白鼠（未死者处死）按顺序放于蜡盘中，用剪刀剪开腹部并向上翻起腹壁，暴露肝脏，观察肝脏颜色变化。 三、小鼠腹腔注射的操作演示 用左手固定动物，使其头低位、腹部朝上，右手持注射器从左下或右下腹部向头部方向刺入皮下，进针2~3mm，再以45o角刺入腹腔，当感到落顿感时表明针已经进入腹腔，回抽无血、尿液或肠液即可注射。 注意事项： 1. 缺氧瓶内外表面要干净透明，以利观察动物在瓶内的表现。 2. 必须保证缺氧瓶完全密闭，否则会影响实验结果。 3. 给小白鼠腹腔注药时要稍靠右下腹，勿损伤肝脏，也不要将药注入肠腔或膀胱。 4. 取用浓硫酸和甲酸时要用专用吸管，小心取用，加热时不宜过快，缓慢生成CO。