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2021年微量凯氏定氮法测定蛋白质含量实验报告 2021年微量凯氏定氮法测定蛋白质含量实验报告 PAGE / NUMPAGES 2021年微量凯氏定氮法测定蛋白质含量实验报告 微量凯氏定氮法测定蛋白质含量试验汇报 一、 试验目 1.学习微量凯氏定氮法原理 2.掌握微量凯氏定氮法操作技术（未知样品消化、 蒸馏、 滴定及其含氮量计算等） 二、 试验原理 凯氏定氮法常见于测定天然有机物（如蛋白质, 核酸及氨基酸等）含氮量。 当日然含氮有机物与浓硫酸共热时, 其中碳、 氢被氧化成二氧化碳和水, 而氮则变成氨并深入与硫酸作用生成硫酸铵。此过程称为“消化”。 此过程进行相对较为缓慢, 通常需要加入硫酸钾或硫酸钠以提升溶液沸点, 并加入硫酸铜作为催化剂, 以促进反应进行。氧化剂过氧化氢也能加速反应。 消化过程: 蒸馏: 在消化完全样品溶液中加入浓氢氧化钠使呈碱性, 加热蒸馏, 即可释放出氨气。 反应方程式以下: 吸收与滴定: 蒸馏所放出氨, 可用硼酸溶液进行吸收, 待吸收完全后, 再用盐酸标准溶液滴定, 直至恢复溶液中原来氢离子浓度为止（即滴定至蓝紫色), 最终依据所用标准酸当量数（相当于待测物中氨当量数）计算出待测物中氮量。 三、 试验试剂、 材料和器材 试验材料: 食用面粉。 试验试剂: 浓硫酸、 30%氢氧化钠溶液、 克氏催化剂、 2%硼酸、 指示剂、 0.01M HCL。 试验器材: 凯氏烧瓶、 电炉、 凯氏定氮蒸馏装置、 锥形瓶、 100ml容量瓶、 酸式滴定管。 四、 操作步骤 1.消化 （1）正确称取1克食用面粉, 用称量纸卷好小心送入至50毫升凯氏烧瓶底部, 切勿沾于瓶口或瓶颈上; （2）向另一烧瓶加入1ml水作空白对照; 在每个烧瓶内加入硫酸钾—硫酸铜混合物（克氏催化剂）少许, 浓硫酸10ml, 小瓷片两粒, 摇匀; （3）将烧瓶约60度角固定在铁架上, 每个瓶口放一小漏斗, 在通风厨内电炉上消化; （4）在消化开始时, 应控制火力, 不要使液体冲到瓶颈; （5）待瓶内水汽蒸完, 硫酸开始分解并放出SO2白烟后, 合适加强火力, 继续消化, 直至消化液呈透明绿色为止; （6）消化完成, 待烧瓶内容物冷却后, 加蒸馏水10ml（注意慢加, 边加边摇）; （7）冷却后将瓶中内容物转入100ml容量瓶中, 并用蒸馏水洗烧瓶数次, 溶液一并倒入容量瓶, 最终定容至刻度摇匀, 做上记号备用。 2.蒸馏 （1）蒸馏器洗净后, 开放水龙头P3, 使水进入A室, 水放至A室球部2/3处即可。 （2）取3个50ml锥形瓶, 分别加入10ml硼酸（内加有混合指示剂）。用表面皿复盖备用。 （3）加样 ① 用移液管吸收2ml消化液, 小心地由漏斗D倾入B室; ② 取一个盛有硼酸锥形瓶, 置于M管下, 使管口恰好接触硼酸溶液, 用量筒从漏斗D加入30%氢氧化钠5ml, 随立即P4夹紧, 并往漏斗加入少许蒸馏水封闭。 （4）蒸馏 ① 用酒精灯加热, 维持火力恒定, 沸腾不可高于Y管口以免A室溶液从Y管倒吸, 待第一滴蒸馏液从冷凝柱F顶端滴下时起, 继续蒸馏5分钟; ② 然后将锥形瓶放低, 使导管离开液面再蒸2分钟, 最终用蒸馏水洗导管外壁, 蒸馏完成, 取下锥形瓶准备滴定。 （5）空白蒸馏 ① 用移液管分别吸收2ml蒸馏水按上述操作步骤进行蒸馏。 LH L H 3.滴定 （1）蒸馏完成, 用微量酸式滴定管, 以0.01mol/L 盐酸标准溶液进行滴定锥瓶内溶液, 溶液由蓝绿色变为淡紫色或灰色, 即为终点。 （2）统计所用盐酸量。 4.计算 若测定样品含氮量部分只是蛋白质则: 式中: A为滴定样品用去盐酸平均毫升数; B为滴定空白用去盐酸平均毫升数; C为称量样品克数: 0.0100为盐酸当量浓度（实际上, 此项应按试验中使用盐酸实际浓度填写）; 14为氮原子量; 6.25为常数（1毫升0.1N盐酸相当于0.14毫克氮）。 五、 试验结果 序号 称量样品(g） 滴定样品用去盐酸（ml） 滴定空白用去盐酸（ml） 1 1 15.2 0.12 2 1 15.4 若测定样品含氮量部分只是蛋白质, 则: 式中: A为滴定样品用去盐酸平均毫升数; B为滴定空白用去盐酸平均毫升数; C为称量样品克数: 0.0100为盐酸当量浓度（实际上, 此项应按试验中使用盐酸实际浓度填写）; 14为氮原子量; 6.25为常数（1毫升0.1N盐酸相当于0.14毫克氮）。 六、 注意事项 1.本法适适用于0.05-3.0mg氮, 样品中含氮量过高时, 则应降低取样量或将样液稀释。 2.勿使样品粘于烧瓶颈部。放置液体样品时, 需将吸管插至烧瓶底部再放样