IVM对鲫鱼影响研究.docVIP

IVM对鲫鱼影响研究 本文 伊维菌素(Ivermectin，IVM)为阿维菌素的衍生物，是由链霉菌产生的一种大环内酯类物质，具有用量小、效果好、安全性高等特点，在农牧业中常作为抗寄生虫剂和杀蜻剂使用。随着水产养殖规模和密度的不断扩大，一些寄生虫病如鲺病、车轮虫病、指环虫病和异尖线虫病等给水产养殖业造成的损失与日剧增，甚至可能危害人类健康［1］。作为一种新型、高效的鱼类抗寄生虫药剂伊维菌素在国外水产养殖中已有一定范围的使用。欧洲许多国家如苏格兰、爱尔兰等将其添加到饲料中，用于鲑鱼和海鲷养殖中的海虱防治［2－3］。我国主要将其应用于淡水鱼养殖中的斜管虫、车轮虫病防治［4－5］。目前，有几篇文献报道了IVM对哺乳动物的毒性作用，如Lankas等［6］实验表明IVM不具遗传毒性和潜在致癌性;Abeer等［7］实验结果显示，当与P－糖蛋白抑制剂联合使用时，IVM会影响雄鼠的生殖系统;Muhamad等［8］研究发现，IVM还会一定程度上影响动物的免疫力。IVM现在作为渔药使用范围越来越广泛，因此除了要关注它的环境毒性外，研究它对养殖鱼自身的毒性作用也是很有必要的，硬骨鱼类的血脑屏障发育不完善，因此IVM较易到达鱼的头部，但目前关于IVM在鱼体内的毒理学方面研究甚少。鱼类的血液指标与许多因素有关，如机体的年龄、营养代谢状况、健康状况等。当鱼体受到外界因子的影响而发生生理或病理变化时，必定会在血液指标中反映出来，因此血液指标常被用来评价鱼类的营养、健康状况及对环境的适应性，是重要的生理、病理和毒理学指标［9］。本实验以不同给药剂量研究了IVM对鲫(Carassiusauratus)血液成分的影响，以期评价IVM对鲫的毒性效应，为IVM的科学使用和管理提供一定的依据。 1材料与方法 1.1实验动物 鲫购自上海果园集贸市场，健康无伤病，平均体重(250±20)g。实验前在循环水养殖箱(250cm×150cm×70cm)中暂养30d，水温控制在(25±1)℃，增氧机充氧，投喂全价鱼饲料(浙江恒兴饲料有限公司)，暂养期间死亡率低于5%。 1.2仪器与试剂 实验所用仪器:纯水机(Milli－Q)、电子天平(FA2004)、超低温冰箱(ThermoForma－700)、全血分析仪(BC－2800Vet)和生化分析仪(BS－200)等。所用药品:IVM标准品(Sigma公司)、无水乙醇和肝素钠均为分析纯(国药公司)、Milli－Q超纯水、总蛋白(TP)测定试剂盒(双缩脲法)、白蛋白(ALB)测定试剂盒(溴甲酚绿法)、总胆红素(Tbil)测定试剂盒(Tb－D:重氮法)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)测定试剂盒(紫外－乳酸脱氢酶法)、碱性磷酸酶(ALP)测定试剂盒(AMP缓冲液法)和钙测定试剂盒(Ca－O邻甲酚酞络合酮终点法)，上述试剂盒均购自迈瑞生物医疗电子股份有限公司。 1.3给药与采样 将实验用鲫随机分成A、B、C、D、E五组，每组27尾。A、B、C三组口灌给药，给药剂量分别为3.0、1.0、0.4mg/kg，以无水乙醇为溶剂;D组口灌与前三组等体积的无水乙醇作对照，每条鲫鱼灌入的无水乙醇的量小于0.3mL;E组不做任何处理。给药前6h禁食，给药后6h投饵。分别在给药后1、2、4、8、16、24、48、96、192h取样，每个时间点每组均取3尾鱼，抽取鲫血液后分成两份，置于含少量1%肝素钠(已风干)离心管中。一份立即进行全血分析，另一份经离心5min后分离血浆(离心力2000g)，于－80℃保存用于血液的生化分析。 1.4血样分析 鲫经静脉采血后立即进全血分析仪进行分析。用于生化组分分析的血浆从－80℃冰箱中取出后，在0℃的条件下解冻，将解冻后的血浆摇匀后进生化分析仪分析。 2结果 2.1IVM对鲫血细胞的影响 口灌IVM对鲫血液中红细胞(RBC)、白细胞(WBC)、血小板(PLT)、红细胞压积(HCT)、血红蛋白(HGB)等指标的影响结果见表1。组间单因素方差分析可知，实验组鲫RBC、WBC、HGB、HCT与对照组间均无显著性差异，而PLT则与对照组存在组间显著性差异(P=0.043＜0.05)。双样本等方差t－检验显示:D组和E组间无显著性差异，D组和A、B、C组间均存在显著性差异(P值分别为0.02、0.016和0.007，均小于0.05)，表明口灌IVM对鲫PLT数量有显著影响。图1显示，不同采样时间，给药组鲫的PLT数量波动较大:给药后8～16hPLT数量快速增加，16～24h数量相对稳定，24h后PLT的数量开始下降，至192hPLT值逐渐恢复到对照组水平。A(3mg/kg)组给药16h后开始出现死鱼，解剖