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FISH技术临床应用会计学荧光原位杂交（Fluorescence in situ Hybridization，FISH）生命科学中的“钓鱼” 技术 基本原理：应用荧光染料标记探针DNA，变性成单链后与变性后的染色体或细胞核靶DNA杂交，在荧光显微镜下观察并记录结果。操作流程简图制片预处理 破坏细胞膜利于探针 杂交。 蛋白酶消化、HCl处理 制备的质量 新鲜程度结果分析FISH 变性 杂交 洗涤 复染操作流程简图结 果 判 断标本为新鲜细胞制片：阈值建立采集20例正常人细胞。阈值测定：每例分析至少100个细胞，统计出现2个以上阳性信号细胞数目的百分比。 阈值= 平均数（M）+ 3X标准差（SD）结果判断每例样本随机计数细胞（至少100个）如果检测值阈值，判定为阳性结果；如果检测值阈值，判定为阴性结果；如果检测值=阈值，加大观测样本细胞数目。FISH技术的临床应用FISH在血液及淋巴肿瘤中的应用FISH技术在产前诊断中的应用FISH在泌尿系肿瘤中的应用FISH技术在宫颈癌检测中的应用其它FISH在血液及淋巴肿瘤中的应用赵荣 血象 （CML）赵荣 骨髓象(CML)覃长江血象(MD/MPD)覃长江骨髓象(MD/MPD) BCR/ABL阴性(图片来自覃长江) MD/MPDBCR/ABL阳性(图片来自赵荣) CML陆晓逸骨髓象（CLL）D13S25/P53基因阴性 （来自陆晓逸） CSP12基因阴性 （来自陆晓逸）PML/RARa阴性(图片来自彭志新)PML/RARa阳性 (图片来自卜丽敏)卜丽敏骨髓象FISH技术在产前诊断中的应用染色体异常的发生机率出生婴儿 0.6%先天性智力障碍（MR）患者23%先天性心脏病 13%SAB 夫妇5% 死胎和 围产期死亡胎儿6.0%自然流产 (前三个月) 60% 唐氏综合症21号染色体三体, 95-97% 多余的染色体来自母亲, 唐氏综合症与母亲的年龄有关系, 确切的病因不是很了解.活产新生儿发病率为1 /800 to 1 /1,100 , 唐氏综合症与文化、种族、社会阶层以及地理区域都没有必然的联系。智能较正常儿童低，认知困难，发育迟缓。他们也有很特殊的面貌，通常双眼距离较远、眼睛向上斜、鼻梁骨平坦，嘴、牙齿及耳朵均细小。肌张力低。 Turner 综合症1个x染色体的全部或者部分丢失 ，只发生在女性。是最常见的染色体异常导致的疾病 ( 活产女性新生儿发病率大约为 1 / 2500 ) 身材矮小、卵巢不发育、性幼稚、 蹼颈、 肾脏和甲状腺有问题, 骨骼畸形等生长激素治疗, 雌激素替代治疗等GLP13/GLP21阴性21+13+FISH在泌尿系肿瘤中的应用概 述常用诊断及监测膀胱癌膀胱镜检查：病人痛苦，难以接受细胞形态学检测：敏感性低尿液中抗原检测：虽灵敏性高于细胞形态学检测，但特异性较低，不能成为可靠的诊断指标。概 述 FISH检测：9号染色体部分（如p16位点）或全部丢失。3号、7号及17号染色体的非整倍性。膀胱癌的灵敏度大约 80%, 特异性大约 96% 非创伤性及非痛苦性膀胱癌FISH 探针组(一)疾病名称检测探针标记颜色探针定位探针名称患者中常见异常类型膀胱癌GLP P16/CSP17 红/绿P16：9p21CSP17:17p11.1-q11.1 P16：细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子2ACSP17:17号染色体着丝粒 P16缺失；17号染色体非整倍性 临床意义 随着对膀胱癌遗传学改变的深入研究，人们发现9号染色体部分（如p16位点）或全部丢失是最常见遗传学改变，且这一改变与膀胱癌的早期发生密切相关。P16为抑癌基因，通过CDK4对细胞增殖分裂起负调控作用，CDK4与cyclin D形成复合物促进细胞从G1-S转换，促进细胞有丝分裂，P16基因异常在膀胱癌发生早期出现.膀胱癌FISH 探针组(二)疾病名称检测探针标记颜色探针定位探针名称患者中常见异常类型膀胱癌CSP 7/CSP3 红/绿CSP7: 7p11.1-q11.1 CSP 3: 3p11.1-q11.13 、7号染色体着丝粒3、7号染色体非整倍性 临床意义膀胱癌的发展与染色体不稳定性紧密相连，特别是与3号、7号及17号染色体的非整倍性密切相关。3、7、17 染色体的不稳定性与肿瘤的浸润行为有关 ，3，7，17改变在病程发展中出现。CSP 7/CSP3阴性CSP7/CSP3阳性FISH技术在宫颈癌检测中的应用临床检测方法传统巴氏细胞学涂片液基薄层细胞检测(TCT）HPV病毒检测荧光原位杂交（FISH）检测三种检测方法比较方 法特异性（％）敏感性（％）形态学检测9055-80HPV检测64－9584-100F