pcr法获取目的基因.pptxVIP

1;2021/4/25;2021/4/25;一、PCR技术的创建;2021/4/25;;1983年Mullis的构思;Taq DNA聚合酶（来自于Thermus aquaticus，水生栖热菌 );2021/4/25;（1）类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于寡核苷酸引物 （2）PCR过程：由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成 ①变性：94℃左右，使双链DNA模板解离成为单链； ②复性：55℃左右，引物与模板DNA单链互补配对结合； ③延伸：72℃左右，“模板-引物结合物”在DNA聚合酶作用下，以dNTP为原料，以靶序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理，合成新的DNA链 （3）重复“变性--退火--延伸”的循环，可获得大量的新DNA链，而且这种新链又可成为下次循环的模板，从而指数级地获得大量DNA产物，数小时内可使目的基因的数量扩增数百万倍。;;3.PCR技术的特点;三、PCR技术的反应体系和条件;PCR技术的基本过程(1);PCR技术的基本过程(2);PCR技术的基本过程(3);2021/4/25;（1）PCR反应成分;2021/4/25;2021/4/25;Taq DNA聚合酶（thermus aquaticus) ①浓度：0.5-2.5 U/50 ?L体系，所用的酶量可根据DNA、引物及其它因素的变化进行适当的增