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乌蕨抗氧化活性探究 [摘要]目的研究乌蕨总黄酮体外抗氧化活性。方法采用分光光度法，测定乌蕨总黄酮对羟自由基、脂质过氧化的清除能力、总还原力和总抗氧化作用，并通过多元线性回归分析，考察了乌蕨总黄酮含量及其体外抗氧化活性的相关性。结果乌蕨总黄酮具有较强的抗氧化性能、自由基清除能力和一定的还原力，可有效抑制脂质过氧化，且抗氧化作用与乌蕨总黄酮含量呈正相关。结论乌蕨总黄酮具有显著的抗氧化活性，黄酮类化合物可能是其抗氧化作用的主要物质基础。 [关键词]乌蕨;总黄酮;抗氧化 乌蕨[Stenolomachusanum(L.)Ching]为鳞始蕨科植物乌蕨的全草，又名野鸡尾、金花草、中华金粉蕨，具有清热、解毒、利湿、止血的功效[1]。其主要含有芳樟醇、松油醇和香叶醇等挥发性成分以及木犀草素、牡荆素等黄酮类化合物[2~4]。据报道，乌蕨具有抑菌、护肝、止血、解毒等作用，且安全，无毒副作用[5~7]。目前国内研究主要集中在乌蕨抗菌作用，笔者未见对其抗氧化作用的报道。为了合理利用该植物资源并确定其主要抗氧化活性成分，笔者对其进行了体外抗氧化研究，现报道如下。 1仪器与试药 1.1仪器BS224S精密电子天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司)，TU-1900双光束紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限公司)，KQ-5000超声波清洗器(昆山超声仪器有限公司)。 1.2试药乌蕨药材于2008年10月采自杭州九溪，经熊耀康教授鉴定为乌蕨[Stenolomachusanum(L.)Ching]的地上部分，阴干，粉碎，备用。芦丁标准品购自中国药品生物制品检定所(批号:100080-20030);大豆卵磷脂购自Sigma公司(批号:;其他试剂均为分析纯。 2方法 2.1乌蕨提取物的制备定量称取乌蕨干燥粗粉10g，加16倍量含0.1%盐酸的60%乙醇回流提取4h，提取1次，提取液减压浓缩至含醇量约10%抽滤，除去杂质，加60%乙醇定容至100mL，作为供试品溶液，备用。参照文献[8]，经测定其总黄酮含量为11.89%。 2.2抗氧化活性实验[9~11] 2.2.1磷钼络合物法总抗氧化活性的测定在5mL具塞试管中加入供试品溶液适量，加试剂液4mL，加纯化水定容至5mL，加盖，混匀，置95℃水浴反应30min，冷却后，以纯化水作空白，于695nm波长下测定其吸光度。 2.2.2还原力测定取供试品溶液适量，加入磷酸缓冲液(0.2mol·L-1，pH6.6)1.5mL及1%铁氰化钾溶液1mL，50℃保温20min后，加入10%三氯乙酸溶液1mL，混匀，加纯化水2.5mL及0.1%三氯化铁溶液0.1mL。在700nm处测定反应液吸光度值。吸光度值越大，表示还原力越强。 2.2.3脂质体氧化法将大豆卵磷脂分散于去离子水中，20kHz超声波处理30min，周围以冰水冷却，制得大豆磷脂浓度为0.8%的人工脂质体。取脂质体1mL，加入供试品溶液适量，以10mmol·L-1乙酸铜溶液20μL催化氧化反应，混匀后放置于回转式恒温水浴振荡器上，于暗处37℃、100r·min-1进行开口氧化，每隔一定时间，取氧化液0.5mL，加纯化水至5mL，于235nm处测定其吸光度，以摩尔消光系数ε=26000(mol)-1·L·cm-1计算脂质体体系中共轭二烯氢过氧化物的生成量。 2.2.4抗羟自由基(·OH)作用实验在5mL具塞试管中加Tris-HCl缓冲液1.0mL，加入供试品溶液适量、亚甲基蓝溶液1.0mL、过氧化氢溶液0.50mL、硫酸亚铁溶液0.50mL，加纯化水稀释至刻度。用直径1cm比色皿，以纯化水作空白，于663nm波长处测定吸光度(A)，其清除率可用下式计算: A样:加入清除剂后测得的反应体系吸光度值;A未损:指示剂本身的吸光度值;A损:未加清除剂时反应体系吸光度值。 3结果 3.1乌蕨总黄酮体外抗氧化活性见表1。样品还原力和总抗氧化值均以吸光度(A)值表示。 由表1可见，乌蕨总黄酮具有较强的抗氧化活性，可提高羟自由基的清除率，抑制卵磷脂氧化产物的生成。 3.2乌蕨总黄酮与抗氧化活性相关性分析以羟自由基清除率(X1)、还原力(X2)、CD抑制率(X3)和总抗氧化值(X4)为横坐标，乌蕨总黄酮含量(Y)为纵坐标，采用SPSS13.0软件对表1结果进行线性关系考察，得方差分析表(表2)和回归标准残差正态P-P图(图1)。 由表2和图1可知，P 在95%可信区间内，线性相关系数r=0.9995。 证明回归方程真实、可靠，具有统计学意义。可用于替代实验点对实验结果