石蜡切片的具体步骤与做法.pdfVIP

石蜡切片的具体步骤与做法？ 石蜡切片法即用石蜡作为支持剂进行切片的方法。石蜡切片法是一般组织学、病理学等常规制片方法，因 此用得最多，它有很多优点：比较省时间，容易操作，可切成极薄的切片（ 4um 以下），能制作连续切片， 组织块可包埋在石蜡中永久保存。缺点是只能用于较小的组织块，较大的组织块不易切好，容易破碎，组 织在脱水透明过程中产生收缩并易变脆。制片时间太长。 石蜡切片的制作过程 （一）材料与用具 1．材料：鱼皮肤、性腺、肠、肝胰脏等。 2 ．用具：溶蜡箱、蜡杯、不同熔点的石蜡、酒精灯等。 （二）实验内容与步骤 1．取材及固定 取动物体上的小块组织成为组织块。组织块的大小以不超过 0.5 立方厘米为宜。切去组织块时动作要轻， 切忌用力牵引或挟持，以免组织内部发生变化。 组织块取下后，先用先用 0.85 ％的生理盐水漂洗以戏曲血液与污渍，如果是管状组织则必须把管腔中污物 洗净， 可用注射器自一端向管腔中注射生理盐水数次， 使其管腔冲洗干净， 切忌不可用刀或其他器具刮之。 由动物身上切取的组织必须是新鲜的， 材料越新鲜越好， 一般不应超过死后 24 小时。 如果是管状器官或是 其中有分泌之消化液，则死后应迅速采取，以免组织自溶或上皮剥落。 材料由动物体取下后应当迅速固定，固定的目的是尽快使固定液渗入组织内部，将组织固定，以保持其原 有的结构。不同的组织应选用适当的固定液。固定液的用量与组织块体积之比一般在 20 ：1 。不应使组织 块贴于容器壁上，应记录固定液的名称，材料的种类，动物品种及开始固定的时间。 2 ．冲洗 固定后的组织块在进行脱水前必须用流水洗去固定液。组织块应用纱布包好，注名，放金属水洗网中用流 水冲洗，甲醛固定液固定的组织一般水洗 24 小时， Bouins 固定液固定的组织水洗 24 小时。 AFA 固定液 则不需要水洗。 3 ．脱水和硬化 经过固定后的组织在水洗后要进行脱水，脱水的目的将组织内的水分用酒精或其他溶剂置换出来，使组织 逐渐变硬，便于油类或其他透明及浸入，为熔化的石蜡浸渗到组织中创造条件。 常用的脱水剂是不同浓度的酒精，因为酒精与水有很大的亲和力，酒精浓度可以逐渐升高，置换出组织中 的水。脱水必须充分，脱水不充分会影响透明和浸蜡。脱水过程要逐级上升，不能操之过急，跳级脱水会 引起组织块强烈的收缩变形。 脱水所用的酒精浓度及过程如下： 30 ％—→ 50 ％—→ 70 ％—→ 80 ％—→ 90 ％—→ 95 ％—→ 100 ％( Ⅰ)—→ 100 ％( Ⅱ) 组织块在各级较低浓酒精（小于 70 ％）中脱水的时间应视组织块的大小而定，大小不超过 0.5 立方厘米的 组织块脱水时间为 6 ～ 12 小时，在高浓度酒精中（大于 70 ％）脱水时间为 3 小时左右。组织块在无水酒精 中需经过两次处理，以保证脱净水分。由于无水酒精有使组织变脆的缺点，故在无水酒精中脱水的时间不 宜过长，一般应在 15 ～ 30 分钟左右。在脱水瓶中酒精的量与组织块之比约为 50 ： 1。 简化步骤如下： 70% （一夜）—— 80% （1 小时） —— 90% （30 分） —— 95% （30 分） —— 100% （15 分） —— 酒精 + 二甲苯（ 15 分） —— 二甲苯（ 3 分） —— 石蜡 + 二甲苯（ 30 分） —— 石蜡（ 80 分） 4 ．透明 透明是石蜡切片法切片前必经的一步。其目的在于用矿物油或植物油等透明剂置换出无水酒精，以便于熔 化的石蜡浸渗到组织间隙中，故透明剂必须是能分别与石蜡和酒精相溶的。经过透明剂处理的组织块用肉 眼对光观察呈透明现象，所以这个过程称为透明。 常用的透明剂有二甲苯、苯、甲苯等，这些都是穿透力强易使组织变脆的透明剂，因此透明的时间宜短， 一般在 20 分钟即可。 透明时组织块由无水酒精中取出，先放入二甲苯和无水酒精等量混合的溶剂中 1 小时左右，然后取出放入 纯二甲苯中 20 分钟即可。 5 ．浸渗 浸渗过程是使包埋组织用的物质深入到所有的组织间隙中，然后再通过各种方法使这种