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实验一质粒DNA的提取及定性定量分析 实验一质粒DNA的提取及定性定量分析 实验一质粒DNA的提取及定性定量分析 XX 学院  课程实验报告 姓名 日期  专业 第 次实验  同组姓名  班级  成绩 指导教师 实验名称 实验一 质粒 DNA 的提取及定性定量分析 一， 实验目的 通过本实验学习和掌握碱裂解法提取质粒的技术与方法。 二， 实验原理 碱裂解法提取质粒是根据共价闭合环状质粒 DNA 与线性染色体 DNA 之间在拓扑学上的差异而到达别离目的。 在 PH 介于 12.0~12,5 这个狭窄的范围内， 线性的 DNA 双螺旋结构解开而变性， 而共价闭合环状质粒 DNA 的氢键会断裂， 但两条互补链彼此相互缠绕，仍会紧密结合在一起，当参加 PH4.8 的乙酸甲高盐缓冲液恢复 PH 至中性时，共价闭合的环状质粒 DNA 的复性迅速而准确，而线性染色体的 DNA 因两条互补链已完全分开，复性就没这么迅速准确，它们缠绕形成网状结构， 通过离心，染色体 DNA 与大分子的 RNA 、蛋白质— SDS 复合物等一起，沉淀下来而被除去。 三， 实验器材 液 III. 四，  小指管、台式离心机、漩涡振荡器、大肠杆菌、冰、溶液 、酚：氯仿：异戊醇、氯仿：异戊醇、无水乙醇、 70% 乙醇、 实验步骤  I 、溶液 II 、溶 TE 缓冲液 等 1、 将过夜培养的大肠杆菌菌液参加 1.5ml 小指管中，  4000r ／ min  离心  1min ， 吸去培养液，将所有菌体细胞收集到一个小指管中。 2、 参加 100 微升溶液 I 于含菌体细胞的小指管中， 漩涡震荡将细胞沉淀悬浮， 室温放置 10min. 3、 参加 200 微升溶液 II 〔新鲜配制〕 ，轻轻混匀内容物， 1min 之内参加 150 微升溶液 III 〔冰上预冷〕，盖紧管口，轻轻混匀数次，冰上放置 15min 让 质粒 DNA 复性〔千万不可以用漩涡振荡器〕 。 4、  12000r／ min  离心  10min ，将上清液转至令一   小指管中。 5、 向上清中参加等体积酚：氯仿：异戊醇〔 混匀后，冰上放置 10min ， 12000r ／ min  25:24:1 去蛋白质和脂质〕 ，漩涡 离心 10min ，将上清液转至令一  小指管中。 6、 向上清液参加 2 倍体积无水乙醇，漩涡混匀后，冰上放置 ／ min 离心 10min ，吸去上清液。  10min ， 12000r 7、 用 1ml 70% 乙醇洗涤质粒  DNA  沉淀一次，  12000r ／ min  离心  5min，吸去 上清液，空气中枯燥。 五，  8、 参加 20 微升 TE 使用。 实验结果及分析  缓冲液， 使质粒  DNA  完全溶解，  --20℃保存， 待下一实验 液  III  实验中，步骤 2 参加溶液后那么出现白色絮状物质，步骤  I 后现象无明显变化，而步骤 6 参加无水乙醇后那么沉淀出  3 参加溶液 DNA 。  II 、溶