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hanks液的配制细胞培养技术 hanks液的配制细胞培养技术 PAGE PAGE19 hanks液的配制细胞培养技术 PAGE Hanks液的配制：①NaCl8克、KCl克、MgSO47H2O克、MgCl·6H2O 克溶于800毫升重蒸馏水中；②CaCl2(无水克溶于100毫升重蒸馏水中；③葡萄糖毫克、NaHPO4克、KH2PO4克、0.4%酚红液5毫升溶于100 毫升重蒸馏水中。将上述 3种溶液混和，8磅30分钟灭活菌，或用玻璃滤器过滤。 保留在5℃备用，用前以 5%NaCO3调pH。 细胞培养技术（一） 一.细胞培养的基本源理 细胞培养是用酶消化法将组织碎块分别成单个细胞，用培养基制成细胞悬液，在体外合适条件下，使细胞生长生殖，并保留其必然的结构和功能特点。细胞培养与组织培养、器官培养主要不一样点在于原始培养的对象不一样。细胞培养使用的是单个细胞悬液，组织培养使用的是组织块(0．5～1立方毫米)或薄片(厚0．2毫米)，而器官培养使用的是器官原基或器官的一部分或整个器官。在 组织培养中，细胞自组织块周围移出并生长，细胞在生长过程中总有搬动 (运动)或其他变动，这 样就使被培养的组织难以长远保持其原有的结构和功能。培养时间越长，发生变化的可能性越大，结果常使单一种类的细胞保留下来，最后成了细胞培养。在细胞培养中，细胞生命活动和体内细胞相同，依旧是相互依存的，表现必然的组织特异性，因此组织培养和细胞培养本质上无严格差异。 细胞培养技术是生命科学中常用的研究手段，该方法能除去神经体液因素的影响及肝、肾解毒功能的搅乱，观察某些因素或药物对培养细胞的直接作用。经过实验可获得某一种类细胞的纯培养。如心肌组织中心肌细胞约占50％，非心肌细胞占50％；而经纯化分其他心肌细胞悬液中，心肌细胞可达95％以上，这样，心肌细胞原代培养实验基本不受其他细胞的搅乱。在细胞培养实验 中能直接观察到培养细胞生命活动的动向过程；用准时显微摄影记录可发现一些肉眼观察不到的生命现象；还可利用电镜手段、同位素标记、放免法和免疫组化法等来研究细胞形态结构及细胞 内化学物质的分布。其他，还能够节约研究开销。如在某些研究中，用100只动物做实验所获得结论与用100张盖玻片或几十个培养瓶而获得结论拥有相同的统计学意义，而细胞培养较之大批量的动物饲养开销要小。 但细胞培养方法也存在不足之处：培养细胞失去体内细胞的限制和整体的调治作用，细胞形态和功能会发生必然程度的改变。培养方法、实验试剂对细胞形态和功能有必然的影响，如胰蛋白酶可损坏细胞表面受体、酶、抗原等。长远体外培养的细胞，由于屡次传代、冻存和操作等因素的 影响，可能发生染色体非整倍体改变，呈长生化或癌变的特点。 二.细胞培养的基本设备与用品 细胞培养的基本设备 细胞培养的基本设备有：CO2培养箱，倒置显微镜，净化台，压力蒸汽消毒器，自动双重纯水蒸馏器，液氮罐，冰箱，电热干燥箱，电热恒温培养箱，电动吸引器，抽气泵等。 常用的实验用品 玻璃器皿 细胞培养所用的玻璃器皿应由透明度好、无毒的中性硬质玻璃制成。常用的有以下几种：国产螺旋口培养瓶[有12．5毫升，25毫升，100毫升等规格，外国培养瓶常以底面积(平方厘米)表示]；培养皿(直径有3．5厘米，6厘米，9厘米，10厘米等规格)；离心管(5毫升，10毫升)；注射器(1毫升，5毫升等)；用生理盐水瓶取代的储藏瓶(100毫升，250毫升，500毫升)；青霉素瓶(5毫升)；西力辛瓶(10毫升)；其他还有尖吸管和移液管，载玻片(厚度0．8～1．2毫米)，盖玻片(厚度0．12毫米)，储藏尖吸筒用的玻璃筒或金属筒，漏斗，烧杯，量筒，贮蒸馏水瓶，冷 冻管(1．5毫升，2毫升)等。 塑料品 多孔培养板规格有4、6、12、24、96孔等，培养皿直径有3厘米、6厘米、10厘米等。塑料品经消毒灭菌密封包装，供一次性使用，重复使用的需经特别方法冲洗消毒。塑料器械厚薄均匀， 有的表面经特别办理，细胞易于生长。 器械 解剖刀、眼科剪和镊(直头和弯头)、中号圆头镊、止血钳等。 杂用品 金属饭盒、试管架、各种规格胶塞、记号笔、搪瓷盘、吸头(吸取液体的胶帽)、酒精灯、酒精、碘酒棉球瓶、火柴等。 组织培养中使用最多的是吸管、培养瓶、培养皿及各种瓶塞。实验者手中应有三套器械，瓶塞数要大于瓶数，才能保证明验中的循环使用。 .细胞培养用品的冲洗与消毒灭菌 冲洗 常用玻璃器皿冲洗◇冲洗要领 浸泡 初次使用的玻璃器皿呈碱性，表面常附有尘埃和一些对细胞有毒的物质，如铝和砷等。空气湿度高时，玻璃器皿表面又易长霉。使用前，新器皿浸泡在5％稀盐酸中过夜，以中和玻璃表面的碱性物质并去除霉斑；尔后经简单洗刷，流水冲洗(逐片进行)，蒸馏水浸泡，干燥备用。新玻片办理后，短时间不用时，需将它投入95％的酒精中保留，以防玻片长霉。培养