第14章医学遗传学遗传病诊断.pptVIP

第14章医学遗传学遗传病诊断;提纲：;常见遗传病;遗传病的诊断对象;常规临床诊断 系谱分析 生物化学检测分析 细胞遗传学和分子遗传学分析 基因组突变：染色体的数量变化 染色体突变：染色体的结构变化 基因突变：点突变、缺失等方式 ;病史的收集 一般病史，家族史，婚育史，生育史，子女健康状况； 流产、死产、早产史，药物接触史，放射线接触史等。 症状和体征的了解 与其它疾病的共同性及本身的特殊性； 身体发育、智力发育、性器官发育情况。 临床辅助检查 实验室检查、X线、超声、心电图、脑电图、CT等。 ; 系谱分析往往是由先证者的症状、体征、实验室检查和其它辅助检查作出疾病的诊断后，追溯到家系中其他成员，写出系谱图。;（三）生物化学检查;（四）细胞、分子遗传学分析：;G banding karyotype:中文名为G显带核型，是染色体带型中的一种。取中期的染色体，先用胰蛋白酶处理，来部分降解染色体，然后用吉姆萨做简单染色(Giemsa),深色条带代表的是A、T丰富的区域。每条染色体都有自己独特的黑白带型，所以带型可以用来反映染色体的异常状态。 可检测基因组及染色体水平突变：染色体数目增加减少、结构异常（如大片段插入、缺失、置换等） ;Klinefelter‘s Syndrome 克氏综合征（XXY, 两性人）;染色体突变：染色体的结构变化;骨髓增生异常综合征 46,XY,del(20q);猫叫综合征：5p15大段缺失 喉肌发育不良，哭声像猫叫;染色体核型分析适应于：;2.染色体荧光原位杂交（Fluorescence In Situ Hybridization, FISH) ;基本原理：;用于FISH的探针： 1）单拷贝探针：YAC， BAC， Cosmid，Plasmid， cDNA片段 应用： （a）定位DNA片段及嵌合体克隆验证； （b）确定染色体微小缺失与重复； （c）染色体断裂点分析。 （d）间期细胞染色体数目异常诊断。;DNA片段的染色体定位;FISH检测微小缺失;染色体片段重复 ; Down综合征间期细胞中的杂交信号;２）简单重复序列探针或异染色质着丝粒探针 其靶序列为α卫星DNA或卫星III DNA(alpha satellite/satellite III DNA)多位于染色体的着丝粒和异染色质???域，重复数百次至数千次。特点：信号强应用：(a)标记染色体识别 (b)染色体数目异常检测 (c)间期细胞遗传学研究和临床诊断;３）染色体涂染探针(chromosome painting probes) 整条染色体探针或染色体区带特异性探针探针来源：（1）含有人单条染色体的人-啮齿类(human-rodent)体细胞 杂种组织融合的产物；（2）荧光激活的流式细胞仪(fluorescence-activated cell 　　　　 sorter,FACS)分离整条染色体DNA，并以载体克隆 /PCR扩增；（3）显微切割得到染色体或染色体片段，PCR扩增； 应用： （1）染色体数目和结构异常分析； （2）不同物种间的同源性比较； （3）白血病及其它肿瘤的染色体诊断和研究。;多色FISH（muti-color FISH) 多色复合染色体FISH探针(multiplex FISH, M-FISH probes)#两种以上不同的非同位素标记，不同的荧光检测系统，通过不同的滤光片组合或极少数几种非同位素标记探针后，按照不同的比例混合，可以显示多种颜色。;可用于鉴定染色体结构异常;3.基因突变分析：微观序列分析 ;;(1)聚合酶链反应 (Polymerase Chain Reaction，PCR） 聚合酶链反应技术是在体外迅速的选择扩增特定的靶DNA的方法。又称体外DNA克隆技术。;定量PCR (Quantitative PCR); Maxan和Gilbert首先建立了化学方法，Sanger建立了DNA测序的酶学方法。 最新的DNA自动测序法以不同荧光色素标记的四种不同脱氧核苷酸为原料进行酶促合成反应，经过凝胶电泳分离，应用激光分析及计算机处理就能直接读出碱基顺序。极大地推进了生命科学的发展和人类基因组计划的进程，而且测序的长度可以达到1000bp以上。;;PCR相关技术及应用： PCR-ASO PCR-RFLP RT-PCR 多重PCR