Illumina测序介绍课件.ppt

Paired End Sequencing 双末端测序 Double stranded DNA 双链 DNA( 桥式结构 ) 32 Part #Rev.C FOR RESEARCH USE ONLY Paired End Sequencing 双末端测序 Bridges are linearized and the original forward template is cleaved 双链桥式结构被变性，形成线性结构 的 DNA 簇；随后正义链被切除，留下 只含有反义链的 DNA 簇 Original forward strand 原始的正链 33 Part #Rev.C FOR RESEARCH USE ONLY Paired End Sequencing 双末端测序 Free 3 ends of the reverse template and lawn primers are blocked to prevent unwanted DNA priming 为了防止测序过程中不需要的 DNA 延伸， 对流动槽上结合的所有 DNA 分子的 3 端进 行封闭 Sequencing primer is hybridized to adapter sequence Read 2 测序引物与待测 DNA 分子的接头序列杂交 结合 Blocked 3 -ends 阻断 3 端 Sequencing primer 测序引物 Reverse strand Template 反义链模板 34 Part #Rev.C FOR RESEARCH USE ONLY Sequencing By Synthesis 2 nd Read Read 2 边合成边测序 Add 4 Fl- NTPs + Polymerase 加入 4 种不同荧光 标记的 dNTP 和 DNA 合成酶 Incorporated FI- NTP imaged 对结合上的荧光 dNTP 进行照相 Terminator fluorescent dye cleaved from FI-NTP 结合在 DNA 链上的荧光 dNTP 中的荧光标记和阻断基团被 切除，可以继续下一轮反应 X 36 - 251 35 Part #Rev.C FOR RESEARCH USE ONLY Sequencing Paired End Libraries with Single Index Read 单标签（ Single Index ）双末端测序 36 Part #Rev.C FOR RESEARCH USE ONLY Sequencing with Paired Ends 双末端测序（单标签） Single Index Sequencing Utilizes 3 Sequencing Reads 单 index Multiplex Sequencing Utilizes 3 Sequencing Reads 双末端测序使用 3 种测序引物， 3 次序列读取 正向序列读取 索引序列读取 反向序列读取 1 Read 1 Seq Primer (HP6) 3 Paired End Turnaround 序列翻转 Read 2 Seq Primer (HP7) 2 Index Seq Primer (HP8) 37 Part #Rev.C FOR RESEARCH USE ONLY Sequencing Paired End Libraries with Dual Index Read 双标签（ Dual Index ）双末端测序 38 Part #Rev.C