3T3-L1细胞诱导分化.docVIP

可修改 欢迎下载 精品 Word 可修改 欢迎下载 精品 Word 可修改 欢迎下载 精品 Word 首先细胞数一定要够，接触抑制后，加诱导液，诱导液一（IBMX是SIGMA的，浓度我用0.5m mol/l,配的时候用DMSO浓缩1000倍，DEX我用的是Solarbio分装的100MG的也用DMSO溶，Ins我用的人用胰岛素，医院买 的），最主要的是要细胞代数20代以内，换诱导液2时不用1ML的移液枪加用200ul的慢慢加. 让细胞长满以后，接触抑制2天（是细胞退出生长周期），加入含有IBMX（一般使用浓度0.5mmol/L），DEX（地塞米松，一般使用浓度是 1umol/L）和insulin（胰岛素，一般使用浓度1-10ug/ml）的培基2天，再换成只含胰岛素的培基2天，然后每两天换液（普通培基）。这 是分化的步骤，但是最关键的是细胞的传代次数，我现在就在做诱导，细胞传代次数较多，分化率很低。一般说不能超过20代，最好在10代以内。诱导分化中，细胞的传代数和状态是最重要的。 诱导剂的配制 IBMX(异丁基-甲基-黄嘌呤): 分子量：222.2（Sigma:I5879）-20度保存 用二甲基亚砜DMSO配制111.1mg/ml（0.5mol/L）储存液 终浓度为0.5mmol/L,即每100ml培养液加100ul储存液。