电子显微镜样品制备与观察电子显微镜样品制备.pptxVIP

电子显微镜样品制备与观察;主要内容;一、样品的取材与固定;（四）实验方法 1 动物麻醉 将小白鼠放入烧杯，放入一蘸有氯仿的脱脂棉球，用培养皿盖住烧杯口，约3～5min后小白鼠被麻醉； 2 解剖分割 迅速解剖，取出肝脏，在硬纸上用新单面刀片分割成0.5*0.5*0.5mm3 小块，迅速投入准备号的固定液； 3 前固定 2.5%戊二醛0~4℃固定1~2h（固定液需提前准备号）； 4 漂洗 0.1M磷酸缓冲液漂洗3次，每次5～10min,0～4℃；;5 后固定 1％鋨酸固定1～2h，0～4℃； 6 漂洗 0.1M磷酸缓冲液漂洗3次，每次5～10min,0～4℃； 7 脱水 30％乙醇→ 50％乙醇→ 70％乙醇，0～4℃，每步5～10min； 8 保存 70％乙醇0～4℃保存。;（五）实验要求 1 用具干燥； 2 取材 快、准、小、轻； 3 鋨酸有毒，需在通风厨中进行，含鋨酸的废液放入指定容器； 4 每人固定2～3块样品； 5 在固定的过程中要不断震动样品管。;二、样品的渗透与包埋;（四）实验方法 1 脱水 85％乙醇→ 95％乙醇→ 100％乙醇→ 100％乙醇，每步5~10min； 2 置换 丙酮→丙酮，每步5~10min ； 3 渗透 1/2丙酮+1/2环氧树脂1~4h； 4 包埋 先将包埋模块加满环氧树脂，再将渗透过 的材料用牙签挑到包埋模块尖端部分，并在其中渗透3~4h； 5 聚合 加热37℃ → 45℃ → 60℃，各12h。;（五）实验要求 1 所用器具、工具保持清洁干燥； 2 手上若沾有环氧树脂，用丙酮棉球擦去； 每人包埋2～3个样品块。;三、修快与支持膜的制备;（四）实验方法 1 修快 （1）用样品夹头夹住环氧树脂包埋块的2/3左右，夹紧，或用手拿住样品块； （2）用小钢锉或单面刀片修快使达到下面要求：切面光滑平整，尽可能是要观察的材料，切面大小0.5*0.5mm2；3～4个斜面的坡度以45度为宜。 ;2 支持膜的制备 （1）将玻璃条、250ml烧杯洗净，玻璃条先用纱布擦干，然后再用绸布用力反复擦净，250ml烧杯装满蒸馏水； （2）将玻璃条放入0.2~0.3%聚乙烯醇缩甲醛的氯仿溶液中2~4cm深，停留3~5s后提出，在空气中自然干燥； （3）在玻璃条四周用单面刀片将膜轻轻划开，然后以与水面30度角缓慢插入放在日光灯正下方的250ml烧杯的蒸馏水中，同时用眼观察(使眼正好能看到水面反射的日光灯的光线)，使膜完全脱离玻璃条而漂浮在水面上，膜应为均匀的灰色（约15nm）；;（4）将2～4片载网放在膜上，再用镊子轻压1～2下，使载网与膜紧贴； （5）再用比膜稍大的滤纸放在膜的上方，轻压下滤纸一角，在滤纸刚好全部湿润之际将滤纸提起，载网与膜亦贴在滤纸上； （6）将膜向上保存于培养皿中备用。 （五）实验要求 1 制膜所用的器具、蒸馏水、纱布、绸布必须干净，用后洗净，制膜过程要防尘； 2 每人修快2块，制膜2张，将修好的样品块用纸包好写上组号姓名； 3 预习下次实验。 ;四、玻璃刀的制作与超薄切片;五、电子染色;六、电子显微镜的使用与样品超微结构观察;4 加灯丝电源：顺时针旋转至限位处（加灯丝电源必须有高压存在），此时应看到图象，若不能看到图象，请与专职人员联系，切勿随意调整各旋钮。 5 观察:调整放大倍数、亮度、样品XY平移、焦距进行观察。 6 照相：将要照相部位移至视野中心标记方框内，过卷，调整焦距、亮度至自动曝光两个绿灯同时亮，抬起荧光屏进行曝光。 7 关机：将放大倍数调至1000X，调整亮度正好充满荧光屏，取出样品，灯丝旋钮调至最低，高压调至OFF，压下关闭按钮，约5分钟后仪器关闭，切断两个稳压电源开关。 8 记录：包括使用起至时间、观察内容、使用人及所属单位及导师，仪器工作情况。;（二）样品超微结构的观察;9、春去春又回，新桃换旧符。在那桃花盛开的地方，在这醉人芬芳的季节，愿你生活像春天一样阳光，心情像桃花一样美丽，日子像桃子一样甜蜜。8月-218月-21Wednesday, August 25, 2021 10、人的志向通常和他们的能力成正比例。13:29:1613:29:1613:298/25/2021 1:29:16 PM 11、夫学须志也，才须学也，非学无以广才，非志无以成学。8月-2113:29:1613:29Aug-2125-Aug-21 12、越是无能的人，越喜欢挑剔别人的错儿。13:29:1613:29:1613:29Wednesday, August 25, 2021 13、志不立，天下无可成之事。8月-218月-2113:29:1613:29:16August 25, 2021 14、Thank you very much for taking me with you on