5.1 dna的粗提取与鉴定.pptVIP

沿烧杯内壁缓缓加入蒸馏水，同时用玻璃棒沿一个方向不停地轻轻搅拌，这时烧杯中有丝状物出现，注意观察丝状物呈什么颜色。继续加入蒸馏水，溶液中出现的粘稠物会越来越多。当粘稠物不再增加时停止加入蒸馏水（这时溶液中氯化钠的物质的量浓度相当于0.14 mol／L） ③析出含DNA的粘稠物 讨论：加入蒸馏水的目的？ 降低NaCl溶液浓度到使DNA溶解度最低点，使DNA从NaCl溶液中析出 将溶液中的DNA与其他杂质分离，这一步骤是实验成败的关键。实验中应该缓慢贴壁加入蒸馏水，并轻轻地沿一个方向不停地均匀搅拌，以利于DNA分子的附着和缠绕 注意事项： ④滤取含DNA的粘稠物 用放有多层纱布的漏斗，过滤步骤3中的溶液至 1000mL的烧杯中，含DNA的粘稠物被留在纱布上 ⑤将DNA的粘稠物再溶解 取1个50mL烧杯，向烧杯内注入氯化钠的物质的量浓度为2mol／L的溶液20mL。用钝头镊子将纱布上的粘稠物夹至氯化钠溶液中，用玻璃棒沿一个方向不停地搅拌3min，使粘稠物尽可能多地溶解于溶液中 注入氯化钠浓度为2mol／L的溶液20mL ⑥过滤含有DNA的氯化钠溶液 取1个100 mL烧杯，用放有两层纱布的漏斗过滤步骤5中的溶液。取其滤液，DNA溶于滤液中 ⑦提取含杂质较少的DNA 在上述滤过的溶液中，加入冷却的、酒精的体积分数为95％的溶液50mL（使用冷却的酒精，对DNA的凝集效果较佳），并用玻璃棒搅拌，溶液中会出现含杂质较少的丝状物。用玻璃棒将丝状物卷起，并用滤纸吸取上面的水分。这种丝状物的主要成分就是DNA。注意观察丝状物是什么颜色的。 答：因为DNA不溶于冷酒精，而其他物质可以溶解在 酒精中，使含杂质较少的DNA丝状物可以析出, 悬浮于溶液中 讨论： （2）观察丝状物呈什么颜色？ 答：白色 （1）为什么要加50mL的冷酒精？ 2：如何证明他们是遗传物质？ 3：怎样才能将细胞内的这些物质分离出来？ 1：构成生物体的遗传物质是什么？ DNA的粗提取与鉴定 一、基础知识 （一）提取DNA的方法 1、提取生物大分子的基本思路 选用一定的物理或化学方法分离具有不同物理或化学性质的生物大分子 2、生物大分子： 主要指蛋白质、酶和核酸 3、提取DNA的基本思路 利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分 4、DNA的溶解性 DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，利用这一特点，选择适当的盐浓度就能使DNA充分溶解，而使杂质沉淀，或者相反 5、讨论： ①根据DNA在NaCl溶液中的溶解度曲线图，思考在什么浓度下， DNA的溶解度最小？ DNA在NaCl溶液中的溶解度是如何变化的？ 在NaCl溶液浓度低于0.14 mol/L时，DNA的溶解度随NaCl溶液浓度的增加而逐渐降低；在0.14 mol/L时，DNA溶解度最小；当NaCl溶液浓度继续增加时，DNA的溶解度又逐渐增大。 当氯化钠的物质的量浓度为 2mol／L时，DNA的溶解度最大，浓度为 0.14 mol／L时，DNA的溶解度最低。利用这一原理，可以使DNA在盐溶液中溶解或析出。 ②如何通过控制NaCl溶液的浓度使DNA在盐溶液中溶解或析出？ 根据DNA与杂质的溶解度不同分离提取DNA 95%的酒精在DNA提取中的作用： 1.溶解某些蛋白质； 2.抑制核酸水解酶的活性，防止DNA降解； 3.降低分子运动，易于形成沉淀析出； 4.低温有利于增加DNA分子的柔韧性，减少断裂。 根据DNA分子与杂质对酶、高温、洗涤剂的耐受性不同来分离提取DNA. DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精。利用这一原理，可以将DNA与蛋白质进一步分离 6、DNA在酒精溶液中的溶解性 7、DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性 ①蛋白酶能水解蛋白质，但是对DNA没有影响 ②大多数蛋白质不能忍受60～80℃的高温，而DNA 在80℃以上才会变性 ③洗涤剂可以溶解细胞的细胞膜，去除脂质和蛋白 质,但对DNA没有影响 8、DNA的鉴定 ① DNA与二苯胺（沸水浴）会染成蓝色， 因此，二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂 ②紫外灯照射法 A、配制染色剂，用蒸馏水配制万分之五的 溴化已锭（EB） B、将玻璃棒上缠绕的白色絮状物抹于蜡纸上， 再滴一滴EB溶液染色 C、将蜡纸放在紫外灯(260nm)下照射（暗室中）， 可见橙红色的荧光(DNA的紫外吸收高峰在260nm处) ③甲基绿 （绿色） 二、DNA的粗提取与鉴定的实验设计 （一）实验材料的选取 1.材料：鱼卵、猪肝、菜花、香蕉、鸡血、哺乳动 物原红细胞、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜