垂直板聚丙烯酰胺凝胶连续电泳分离乳酸脱氢酶同工酶.pptxVIP

垂直板聚丙烯酰胺凝胶连续电泳分离乳酸脱氢酶同工酶会计学垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳电泳带电颗粒在电场的作用下，向着与其电性相反的电极方向移动，这种现象称之为电泳。聚丙烯酰胺凝胶是由单体丙烯酰胺(Acr)和交联剂N,N’-亚甲基双丙烯酰胺(Bis)在催化剂过硫酸铵(AP)和加速剂N,N,N’,N’-四甲基乙二胺(TEMED)作用下聚合交联而成的三维网状结构的凝胶，通过改变凝胶浓度及交联度来调节凝胶的孔径，具有良好的分子筛效应。它已成为目前生化实验室最常用的支持介质。以它为支持物发展起来的各种聚丙烯酰胺凝胶电泳技术，不仅能分离、小量制备生物大分子，而且可以用来研究生物大分子的性质如电荷、相对分子质量、等电点以及构象等。垂直板电泳将配制好的凝胶溶液注入到两块垂直放置的玻璃板之间聚胶，然后加样进行电泳。 AP-TMTED催化体系 TEMED催化AP生成硫酸自由基：S2O82－ 2SO4·ˉ硫酸自由基的氧原子激活Acr单体并形成单体长链：Bis将单体长链间连成网状结构： 化学聚合的凝胶孔径较小，常用于制备分离胶，重复性好。聚合反应受各种因素的影响：? 催化剂和加速剂的浓度应选择合适的AP和TEMED浓度使聚合时间控制在30—60min内较好，过量的催化剂和加速剂会引起烧胶和蛋白质条带的畸变。?pHTEMED只能以游离碱的形式发挥作用，在酸性条件下，叔胺缺少自由碱基，引发AP产生自由基的过程会被