基础分子生物学Chapter9.pptxVIP

Chapter 9Transcription转录9.1 Introduction引言RNA聚合酶的作用是将双链体DNA的一条链拷贝成RNA链.一个转录单位被转录为一条RNA链.9.2 Transcription occurs by base pairing in a bubble of unpaired DNA.?转录发生在没有配对的DNA转录泡中, 并根据碱基互补配对原则进行.RNA聚合酶将两条DNA链暂时分开, 形成 “转录泡”, 接着使用其中的一条链作为模板, 指导合成互补的RNA.“转录泡” 的长度是12-14bp, 其中RNA-DNA杂合链长度是8-9bp.DNA链分开形成转录泡. 以DNA一条链为模板按碱基互补配对原则合成RNA.在转录中, 细菌RNA聚合酶维持着转录泡的构象, 它使DNA解旋, 又重新聚合, 并维持着DNA模板链, 伴随链和合成的RNA链三者的状态.9.3 The transcription reaction has three stages.?转录的三个阶段.RNA聚合酶结合DNA启动子序列后, 转录启动.在延伸过程中, 转录泡沿着DNA移动, RNA链从5′向3′方向增长.在终止子转录终止, DNA双链重新聚合, RNA聚合酶从DNA链上解离下来.转录有4个阶段, 各阶段RNA聚合酶和DNA发生不同的作用. 酶先结合到启动子上, 然后破坏DNA结构, 在转录起始时酶保持固定, 延伸时沿着DNA移动, 并在终止处解离.9.4 Phage T7 RNA polymerase is a useful model system.?T7噬菌体的RNA聚合酶---一个好的模型系统.T3和T7噬菌体的RNA聚合酶由一条肽链构成, 仅能识别少数噬菌体的启动子序列.他们合成RNA的速度为约200核苷酸/秒,远远快于细菌RNA聚合酶. 9.6 Bacterial RNA polymerase consists of multiple subunits. ?细菌RNA聚合酶由多个亚基组成.细菌RNA聚合酶的核心酶是500kDa大小的多亚基复合物, 一般结构为?2 ? ??结构.DNA夹在一个通道中, 和?以及??亚基接触.9.7 RNA polymerase consists of the core enzyme and sigma factor.?RNA聚合酶包括核心酶和?因子.细菌RNA聚合酶可以分成具有催化转录活性的?2 ? ??核心酶以及仅在起始转录时所需的?亚基?因子改变了RNA聚合酶结合DNA的性质, 使得它对一般的DNA亲和力降低, 而对启动子的亲和力增加核心酶均等地结合到任意DNA序列上. ?因子降低了这种非序列依赖性结合, 而增加了与启动子序列的特异性结合.9.12 Promoter recognition depends on consensus sequences. ?启动子的识别依赖于一些共有序列.启动子是一些特定位点的短保守序列.启动子的保守序列包括起始点处的一个嘌呤, -10区的六聚体TATAAT以及-35区的另一个六聚体.不同启动子之间通常在共有序列的一个或多个位置上存在差别.典型的启动子包括三个元件, -35区, -10区和起始点的保守序列. 印迹法通过蛋白质保护DNA不被核酸酶切割来分析蛋白质新结合的DNA位点. 9.16 ?Substitution of sigma factors may control initiation. ??因子的替换可以控制启动.大肠杆菌有多个?因子, 每一个都能使RNA聚合酶启动-35区到-10区的特殊启动子序列.?70是启动转录的通用因子, 其他因子只有在特定条件下才能被激活.?因子与核心酶的复合物决定了转录起始的启动子的选择.除了?70, 大肠杆菌还有其他受特殊环境诱导的?因子. 在大肠杆菌中, 不同的?因子识别具有不同共有序列的启动子. RseA作为内膜蛋白被合成. 它的细胞质结构域结合?E因子. RseA蛋白依次在外周间质和细胞质中被切割, 而细胞质中的切割释放了?E. 9.18 Sigma factors may be organized into cascades. ??因子可以组成级联反应.当需要一个?因子转录编码下一条?因子的基因时, 就形成?因子级联反应.SPO1噬菌体的早期基因是由宿主RNA聚合酶转录的.一条编码?因子的早期基因促使RNA聚合酶转录中期基因.两条编码?因子亚基的中期基因使RNA聚合酶转录晚期基因.SPO1噬菌体的基因转录是由两个相继更迭的?因子来控制的, 这种更迭改变了起始的特异性. 9.19 Sporulation is controlled by sigma factors. 芽孢形成由?因子控制.芽孢